威正翔禹生物科普：关于胎牛血清知识问答（二）

胎牛血清在细胞培养中受到很多实验人的青睐，今天小编把关于胎牛血清的保存使用做一个整理，希望对于初次接触细胞培养的你能够有所裨益哦！

1、胎牛血清有必要做热灭活吗?  

答：实验显示，胎牛血清是不需要做热灭活的。

（1）首先将胎牛血清置于50℃以上的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此，有些实验室还是把胎牛血清的热灭活作为常规来执行。事实上， 热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质，但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。（2）Triglia和Linscott曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定，他们发现胎牛血清中含有的C1，C6仅达成年动物血清的1-3%，而其它补体成分仅有成年动物的5-50％，至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。Pinyopummintr等证明血清去除灭活步骤不影响牛胚胎的发育分化。又有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用。（3）此外，热灭活经常给血清产品带来负面的影响，对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生，导致很多营养因子的损失。因此，胎牛血清已无需再灭活。

总之，经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量！

2、细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？  

答：一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化。

那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：（1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸；（2）血清质量不好，反复冻融的结果；（3）配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；（4）配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；（5）培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

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