婴儿配方食品中的叶酸测定细解（准备篇）

根据我国的食品安全标准，对婴儿配方食品需测定叶酸含量，以保证在正常范围。具体测定以微生物培养法为首选。小编现将具体过程拆解如下，以资感兴趣人士参考。

所需仪器有天平、培养箱、离心机（需能放置试管）、超声波振荡器、pH计、分光光度计、涡旋振荡器等。所需培养基有维持培养基、接种培养基和测定培养基，可购买商品化产品（建议进口产品，以保证质量），以节省人力和时间。培养基干粉需按产品说明制备和灭菌，放置在10℃以下密闭容器中保存。

样本制备，可直接称量0.1至0.5g，精确至小数点后三位，转入100ml锥形瓶中。用80ml氢氧化钠乙醇溶液溶解，超声震荡2-4小时，加水定容。对样本液进行适当稀释，使样本叶酸含量在0.2ng/ml~0.6ng/ml中。

再取3支试管（所用试管需严格盐酸浸泡和高温烘干消毒），分别加入0.5、1.0、2.0ml稀释后的样本，补水至5ml。再加入5ml叶酸测定用培养液，混匀。

制备叶酸标准溶液。先制备储存液（20μg/ml），即称取20mg标准品，用氢氧化钠溶液在1000ml容量瓶中溶解定容，再用分光光度法进行浓度标定。储存液可在棕色瓶中4℃储存2年。用储存液可配置中间液（0.2μg/ml）和工作液（0.2ng/ml）。再配浓度梯度工作液，使叶酸量从0ng, 0.05ng, 0.1ng,0.2ng递增至1ng（先补水5ml，再加5ml叶酸测定用培养液）。再高压灭菌15分钟。

测定时，向每支测定管加入20μl接种液，塞好棉塞，37℃培养20-40小时，直至获得**浑浊度。

那么，接种菌液如何制备，最后如何用分光光度计检测和分析结果呢？小编下次为您拆解。

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