活性因子的生物测定法

在分析化学中，常常采用色谱、质谱、磁共振和一般生化以及免疫学方法对样本成分进行测定。但还存在一类特殊的测定方法，即生物测定法。生物测定法的产生由来已久，常常用于有生物活性和生理功能的因子的测定。它常常采用一种哺乳动物细胞或者一种细菌，作为可用于观察或测量的响应器或效应器(effector)，来对活性因子进行检测，这也有些近似药效学实验。例如白细胞介素2，它是一种T细胞生长因子，它是用小鼠的T淋巴细胞系CTLL-2细胞的增殖来检测，ED50等于0.1ng/ml，可见该法的灵敏度相当高。

因此，生物测定在方法学上是一种很有特点、很有用的方法。它也不限于测定某个因子，而也可以测定生物制品，如用二倍体细胞的促生长状况来质控胎牛血清。在食品领域中，也有生物测定法，只不过是其中的一个分支，是微生物培养法，或微生物法，来检测维生素，如微生物B12、叶酸、泛酸、烟酸、生物素等。

维生素也是一类活性因子，具有重要的生理作用。例如，缺少叶酸会导致胎儿神经管发育障碍。而我国的婴幼儿配方乳品中，存在有的品牌叶酸等维生素不足的情况，因而达不到补充营养的效果。因此，测定食品中的维生素含量十分重要，尤其是奶制品。

微生物法测定维生素，原理和上面所说差不多。通过添加维生素标准品或样品中的维生素，使原先不含有这种维生素的培养基具有了这种营养，从而使鼠李糖乳杆菌、莱士曼乳杆菌、植物乳杆菌等测定菌能够不断增殖，直到这种维生素营养耗尽。而检测OD值可以确定试管中的菌量。需要注意的是，为了保证线性增长，需要在适当的范围内进行标曲和测定，必要的话对样本进行稀释。又叶酸测定菌鼠李糖乳杆菌据报道，在增殖过程中容易产生大量絮状沉淀，尤其在高浓度标准管中更为明显。因此建议将絮状物质进行充分震荡，并快速进行光密度的测定。同时注意所用初始培养基应尽量不含痕量待测的维生素，否则会造成标曲偏移和本底过高。目前该产品只有进口的质量较为可靠，如微生物培养基生产商HiMedia公司生产的叶酸干酪培养基和维生素B12测定用培养基。

总之，微生物法在生物测定法中灵敏度极高，而且操作步骤简单，不需要特别的技巧和设备，也不需要一系列的提纯步骤。即使有些类别样品需要提取，但步骤仍然简单，因此微生物法在生物测定法中仍然占有重要的一席之地。