快速分离水中肠球菌的方法

肠球菌属（Enterococcus），为革兰阳性，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。肠球菌最初列为D群链球菌，1984年，肠球菌被重新分类为肠球菌属，在经过DNA-DNA和DNA-RNA杂交的研究后证明它与链球菌属有较远的关系。

肠球菌是人类和动物肠道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现，既往认为肠球菌是对人类无害的共栖菌，但近年研究已证实了肠球菌的致病力。在需氧革兰阳性球菌中，它是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌，肠球菌亦可引起院外感染。肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。

肠球菌通常从食品、植物、水和土壤中分离，可能由于它的来源是粪便使得他们的天性在恶劣环境中比较耐受。在牛奶和奶酪制品中通常会找到粪肠球菌、屎肠球菌和少量的坚忍肠球菌，偶然也会发现小肠肠球菌和铅黄肠球菌。不同于其他乳酸菌，肠球菌不能被认为是“一般认为安全”（GRAS），并且它在水中检测是作为粪便污染物的指标的。一般认为对于肠球菌的安全评价程序是一个模棱两可的状况。一方面，肠球菌在作为奶酪技术中作为发酵培养物被认为是由积极作用的；另一方面，它们被认为是新兴的人类病原体。

由于肠球菌的表型多样性，这使得肠球菌种的生理测试鉴定一直存在问题。此外，物种鉴定的常规实验往往需要很长的培养时间。使用16S和23S rDNA基因的基因型鉴定方法更加的准确，但是它们还不能区分所有肠球菌的物种（例如鹑鸡肠球菌和铅黄肠球菌有99.8%的16S rDNA的同源性）。

国标中分离和鉴定肠球菌应用倾注法，根据样液在选择性肠球菌琼脂（36 ℃±2 ℃培养18 h～24 h）或KF琼脂（36 ℃±2 ℃ 培养24 h～ 48h）上生长的典型菌落数，在肠球菌琼脂平板上形成带棕色环的棕黑色菌落；在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落，边缘整齐， 用无菌接种针从每个肠球菌琼脂平板或KF平板挑取5个典型菌落，进一步做确证实验。

HiMedia公司（国际知名微生物培养基生产商）生产的快速肠球菌显色培养基（货号：M1414），该培养基中的蛋白胨为菌种提供氮源，添加的氯化钠使肠球菌的快速生长保持渗透平衡，叠氮化钠能抑制伴随的微生物菌落，尤其是革兰氏阴性菌，存在于肠球菌中的酶β-D-葡糖苷酶裂解显色底物，使菌落呈蓝绿色。HiMedia的快速肠球菌显色培养基用于快速鉴定和区分水样中的肠球菌，18-24h后出结果，方便快捷。我国在新修订的生活饮用水卫生标准GB5749-2006中资料性附件中增加了肠球菌和产气荚膜梭状芽胞杆菌，修订后限值肠球菌/（CFU/100mL） 和产气荚膜梭状芽胞杆/（CFU/100mL）限值均为0，快速肠球菌显色培养基的研发，为快速检测水中肠杆菌起到重要意义。

快速肠球菌显色培养基（货号：M1414）在国际上得到了广泛的应用，如Chellandi Mohandass等人，在研究喀彻湾沿岸的沿海地区，潮汐周期中水质指标的分散性和可收回性文章中就有应用（Chellandi Mohandass, S. Jaya KumarN, Ramaiah.Dispersion and retrievability of water quality indicators during tidal cycles in coastal Salaya, Gulf of Kachchh.Environmental Monitoring and Assessment[J], 2010, 169(10): 639–645）；Krishna M. Raja等人，推定致病性标记香港海鸥形菌的ESBL基因和脂多糖的分子生物学研究中也有应用（Krishna M. Raja ,Asit Ranjan Ghosh. Molecular Insight of Putative Pathogenicity Markers with ESBL Genes and Lipopolysaccharide in Laribacter hongkongensis.Applied Biochemistry and Biotechnology[J], 2014, 174(5) : 1935–1944.）