微生物法与HPLC法测定叶酸含量方法比较

GB 10765-2010《婴幼儿配方食品》中规定了叶酸可以作为婴儿配方食品添加物。因此准确地测定叶酸的含量对婴幼儿配方产品的生产加工、功效评价等有重要意义。维生素的检测方法有仪器法、微生物法和基于微生物法原理的试剂盒法。微生物法是目前应用最为广泛的，也是美国官方分析化学家协会的推荐方法。目前，国家标准GB 5009.211-2014《食品中叶酸的测定》和GB 5413.16-2010《婴幼儿配方食品和乳品中叶酸(叶酸盐活性)测定》中对食品和婴儿食品和乳制品中叶酸的测定均采用微生物法。

除微生物法以外，还可以选用高效液相法测定叶酸的含量。高效液相色谱法是利用高压输液泵将规定的流动相泵人装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离侧定的色谱方法。注人的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进人检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

高效液相法测定食品中叶酸含量操作方法和所用药品分析相似：称取磨细的样品置于离心管中，加入流动相液体，超声波提取15 min－30 min。取出后加入流动相定容，摇匀后过滤，滤液用 HPLC 法分析。

在有限的空间与营养成分条件下，微生物的生长过程会受到竞争与抑制的作用。选用微生物法测定叶酸含量时，自配的基础培养基杂质含量高，建议使用HiMedia公司生产的叶酸测定用培养基（货号：M543）。培养基的pH值对L.C生长很重要，一般保持在pH6.8~7.2,过高过低均不利于细菌生长。测定叶酸常用的菌种酪乳酸杆菌（ATCC 7469）。为保证测定管中滴加等量的接种液,接种液可用10mL灭菌针筒吸取，水平固定于铁架台上轻轻旋转推杆，滴加菌液。测定管比色前，应用混匀器将菌液摇匀后进行比色。

微生物法与高效液相色谱法相比较，其优点是可以测定成分复杂样品中的化合物形式叶酸，结果更准确；对于添加剂形式的叶酸则与HPLC法具有同样的准确度，同时微生物法具有灵敏度高的优点，检测限可达到0.01ng·mL-1，而高效液相色谱法检出限为10μg·mL-1，且价格便宜。但微生物法实验周期长，每周一次的菌种传代保藏比较繁琐；高效液相色谱法的特点是测定结果准确、操作简便、省时省力、分析速度快、分离效果好，是近年来发展速度较快的测定叶酸的方法，分析操作方法和所用药品分析相似，适合检测纯品，但分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵。