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霍乱弧菌的分离与鉴定

2018-11-13 11:03来源:缔一生物

霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一,属于国际检疫传染病,曾在世界上引起多次大流行。霍乱弧菌是该病的病原体,学名V.cholera,属弧菌科,是一种革兰氏阴性菌。



人类在自然情况下是霍乱弧菌的主要易感者,通过污染的水源或饮食物经口传染。在一定条件下,霍乱弧菌进入小肠后,依靠鞭毛的运动,穿过粘膜表面的粘液层,可能藉菌毛作用粘附于肠壁上皮细胞上,在肠粘膜表面迅速繁殖,经过短暂的潜伏期后便急骤发病。该菌不侵入肠上皮细胞和肠腺,也不侵入血流,仅在局部繁殖和产生霍乱肠毒素,此毒素作用于不粘膜上皮细胞与肠腺使肠液过度分泌,从而患者出现上吐下泻,泻出物呈“米泔水样”并含大量弧菌,此为本病典型的特征。


霍乱弧菌分离与鉴定方法


生化鉴定


生化鉴定前,先分离霍乱弧菌,通常情况下,霍乱弧菌在TCBS培养基上典型霍乱弧菌菌落为黄色,扁平,真径 2-3 mm;副溶血弧菌菌落呈圆形,边缘整齐、湿润、稍混浊、半透明,多数具尖心、斗笠状,蓝绿色菌落,直径2-4 mm。


但传统TCBS培养基上的其他的蔗糖发酵菌会影响TCBS琼脂上弧菌的鉴定,影响检测结果。或选用显色培养基分离,缔一生物为您推荐HiMedia公司(国际知名微生物公司)的HiCrome弧菌显色培养基(货号:MV1682),在该培养基上细菌β-半乳糖苷酶和培养基中所包含底物发生反应,使霍乱弧菌呈现紫色菌落;同时可以分离出副溶血性弧菌,呈现蓝绿色菌落,可初步确认副溶血性弧菌和霍乱弧菌的存在。


可选用HiMedia公司HiBio-IDTM弧菌生化鉴定卡(货号:KB007), 12种生化反应:

1

伏普试验

2

精氨酸脱羧试验

3

盐耐量试验(1%)

4

ONPG试验

5

柠檬酸盐利用试验

6

鸟氨酸脱羧试验

7

甘露醇发酵试验

8

阿拉伯糖发酵试验

9

蔗糖发酵试验

10

葡萄糖发酵试验

11

水杨苷发酵试验

12

纤维二糖发酵试验


特点:

△操作简单,省时省力

△省心,所需试剂都包含在试剂盒中

△高效率,一次孵育即出结果

△实验结果准确、可靠


2.血清凝集法


   根据弧菌O抗原不同,分成Ⅵ个血清群,第Ⅰ群包括霍乱弧菌的两个生物型。第Ⅰ群A、B、C三种抗原成份可将霍乱弧菌分为三个血清型:含AC者为原型(又称稻叶型),含AB者为异型(又称小川型),A、B、C均有者称中间型(彦岛型)。


  1992年10月在印度东南部又发现了一个引起霍乱流行的新血清型菌株(0139),它引起的霍乱在临床表现及传播方式上与古典型霍乱完全相同,但不能被01群霍乱弧菌诊断血清所凝集,抗01群的抗血清对0139菌株无保护性免疫。在水中的存活时间较01群霍乱弧菌长,因而有可能成为引起世界性霍乱流行的新菌株。


3.核酸扩增法


  核酸扩增两端,然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增,使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。技术,即聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸,作为引物,对应于待测病原微生物某一段特异性序列。


由霍乱弧菌引起的霍乱疾病,对人类健康危害很大,有效的检测鉴定出霍乱弧菌对人类健康有着重要意义。


缔一生物作为HiMedia公司在中国的代理商,在微生物培养和检测领域,一如既往地为您带来优质的服务。

如需详细了解,可访问公司官网:

http://www.viansaga.com/ ;咨询电话:400-166-8600。