关于SFRE 199细胞培养基的研究

SFRE 199，是对M199培养基的改良型，最初研发是为了生长和维持培养Bak细胞（原代狒狒肾细胞）。SFRE 199分为I型和II型，即SFRE 199-1和SFRE 199-2。

SFRE 199与M199的不同点在于升高了8种氨基酸（精氨酸-盐酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸）和葡萄糖的浓度，并加入硫酸锌、丙酮酸钠和鱼精蛋白锌胰岛素。另外，还降低了硝酸铁、黄嘌呤和碳酸氢钠的浓度。SFRE 199-1与SFRE 199-2的不同在于，前者含有Hank's盐，而后者所含为Earle's盐。

SFRE-199将M199标准配方中的精氨酸增加到150mg/L，半胱氨酸增至4mg/L，胱氨酸增至40mg/L，谷氨酰胺增至300mg/L，谷氨酸增至75mg/L，甘氨酸增至100mg/l，组氨酸增至40mg/L，酪氨酸增至80mg/L，以获得**的细胞生长而未表现出毒性。与加胎牛血清的常规培养基比较，细胞生长速率、产量和蛋白容量均相同。均在移植后第6天单层细胞达到充分融合。

有报道，在SFRE 199-1生长的原代Bak细胞的群体二倍分裂时间(PDT)约为34.2小时，与加有5%牛血清的HLH(含水解乳白蛋白的HBSS)相同，加有3%胎牛血清的M199的PDT为36小时。如果在SFRE 199-1中去除胰岛素或硫酸锌，则细胞不能融合，PDT延长。若含有胰岛素和硫酸锌，则其支持生长的能力相当于标准对照血清培养基。

SFRE 199培养基中除了葡萄糖，还添加了半乳糖，以避免乳酸过度积累。实验发现，添加的D(+)—半乳糖1000mg/L，可使乳酸合成降低54.5%，在21天的观察期间培养基的pH保持稳定（7.3-7.4）。若培养基pH降到6.8，则培养很难维持。

HiMedia公司生产的SFRE 199培养基不含胰岛素和碳酸氢钠，需在使用前单独添加。建议用1N HCl或1N NaOH将pH调低理想pH值的0.2-0.3个pH单位，因为过滤会使pH值略微升高。根据需要，还可以无菌添加其他成分，以保证个性培养基的**化。

SFRE 199培养基有多种应用。除培养Bak细胞外，有报道用不加血清的SFRE-199-2培养牛输卵管峡部上皮细胞和壶腹上皮细胞，体外研究牛的受孕过程。也有报道用SFRE 199-1无血清培养基培养Vero细胞效果较优。而Vero细胞常用于狂犬病疫苗，乙脑疫苗等的生产。因此，SFRE 199培养基具有极大的作为无血清培养基用于疫苗生产的潜力。

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