Vero细胞的无血清培养

Vero细胞是日本学者Yasumura等于1962年从正常成年非洲绿猴肾分离获得的贴附依赖性细胞系，Vero一词由世界语中的verde（意为绿色的）和reno（意为肾脏的）两个词合并而成。Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。

与用作疫苗生产的原代细胞、二倍体细胞和其他一些传代细胞基质相比，Vero细胞具有以下特点：

①来源方便，连续传代，生长速度快；

②对多种病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高；

③遗传性状稳定，恶性转化程度低，生物安全性较高；

④培养条件要求不苛刻，易于在生物反应器实施大规模培养。

疫苗的接种对象主要是大范围的健康人群，其质量和安全性一直是备受关注的问题。

疫苗的质量和安全性在很大程度上取决于疫苗的生产方式和过程。血清是一种组分复杂而尚不完全明确的混合物，至少含有1000种不同的蛋白质，总蛋白量高达60～150g／L，它能为细胞的体外培养提供必要的生长因激素、细胞贴附因子和营养成分。受Vero细胞自身的贴附依赖生长特性和动物细胞培养技术发展进程的影响，本世纪之前的Vero细胞培养及病毒疫苗生产均存在着对血清的依赖。

血清组分的复杂性和不确定性，以及其中存在病毒等病原微生物污染的潜在风险，影响着病毒疫苗的生产工艺和疫苗质量。从病毒疫苗生产工艺角度考虑，血清组分的复杂性和批次间的质量差异增加了病毒疫苗生产的不稳定性和产品质量控制的难度；从病毒疫苗的安全性角度考虑，血清中潜在的病原微生物，如引起牛海绵状脑炎的朊病毒，给疫苗的使用带来了不容忽视的安全隐患。

由血清使用所造成的细胞培养过程和细胞表达产物安全性的不确定因素增加的现实问题，成为动物细胞无血清培养技术研究和应用的发展动因。随着动物细胞无血清培养技术的不断进步，为包括Vero细胞在内的动物细胞大规模无血清培养技术的应用提供了必要的技术支撑，无血清培养已成为包括疫苗在内的生物技术药物生产的总趋势。2010年，美国、欧盟和日本等发达国家将全面停止在生物制药中应用血清，FDA将停止含血清细胞培养工艺生产的生物技术新药的申报受理。

国际上HiMedia公司生产的SFRE199-1培养基是病毒生产细胞培养基M199的改良型。SFRE199分为I型和II型，即SFRE199-1和SFRE199-2。和M199相比，SFRE199显著升高了8种氨基酸的浓度，包括精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸，也升高了葡萄糖的浓度，使能获得较好的细胞生长而不表现出毒性。

另外，加入了硫酸锌、丙酮酸钠和胰岛素，降低了硝酸铁、黄嘌呤和碳酸氢钠的浓度，还添加了半乳糖，以避免乳酸过度积累，并使细胞在维持的延长期内，pH值保持在生理范围。

国外有研究表明，SFRE 199-1可作为无血清培养基的基础成分，用于Vero细胞的培养，并在Vero细胞静置培养中，以SFRE199-1为基础的无血清培养基可获得较好的细胞生长效果。

Vero细胞无血清培养基的优化主要涉及以下两方面。其一，从提高病毒疫苗安全性的需要出发，以非动物来源成分替代动物来源成分、化学组分明确成分替代化学组分不确定成分；其二，从提高病毒疫苗生产效率的目的考虑，根据细胞生长和代谢动力学特征优化培养基的组成。

但无血清培养也存在一定不足，如：

①目前多数无血清培养基的通用性较低，应用不广泛，不具有普遍性；

②目前低血清培养基研究开发的相关数据缺乏在线交流，可查阅的资料有限，不能有效促进细胞驯化技术的发展；

③无血清培养基的制作成本较高，不利于商业化开发与应用；

④细胞在无血清培养基中，对外界条件如物理和化学等因素的改变较敏感，等。

缔一生物作为HiMedia公司在中国的代理商，在细胞培养、微生物培养和检测领域，一如既往地为您带来优质的服务。

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