HiMedia生产的快速鉴定纸的第三方独立验证

HiMedia生产的快速鉴定纸的第三方独立验证

HiMedia laboratories公司生产的HiDtect快速鉴定纸是得到CE认证（欧洲）的，认为符合文件98/79/EC中的“In Vitro Diagnostic Medical Devices Directive， Annex III”条款。同时，这类细菌学辅助鉴别产品生产工艺也通过了世界卫生组织的GMP认证，以及ISO13485（医疗器械）和ISO9001认证。

对HiDtect的第三方验证是在2013年由印度一家环境科学实验室进行的。主要鉴定了最有代表性的5个产品：DT010，DT001，DT002，DT008，DT011。

DT011是对食品致病菌的快速鉴定。选择了10张鉴定纸进行检验。

验证采用的标准菌株如下：

• 大肠埃希氏菌（ATCC 9132）

• 大肠埃希氏菌O157：H7(NCTC 12900)

• 金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）

• 鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 23564)

• 蜡样芽孢杆菌（ATCC 10876）

• 单核细胞增生李斯特氏菌（ATCC 19111）

• 福氏志贺氏菌（ATCC 25908）

验证采用的传统培养基如下：

• 通用培养基：TSA

• 增菌培养基：缓冲蛋白胨水

• 选择性培养基：麦康凯琼脂，Baird Parker琼脂，XLD琼脂，MYP琼脂，PALCAM琼脂和DCA培养基

• 验证培养基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培养基，西蒙氏柠檬酸盐琼脂，兔血浆，尿素琼脂和Andrade蛋白胨水，以及鼠李糖和木糖纸片

验证采用了2种方法，分别为快速鉴定纸的操作方法（HiMedia公司提供）和实验室内采用培养基验证菌种的SOP（EL/WI/5.6.3.3a）

验证采用了鱼制品作为食品样品。

操作人员将上述标准菌株接种在营养肉汤中，用于检验菌种纯度，并通过各自对应的选择培养基划线分离和进行生化试验。

操作人员将上述标准菌株也接种到鱼制品中。将该制品接种到缓冲蛋白胨水中增菌18-24小时（35-37℃），使增菌后的接种量达到10-100cfu/ml）。进行梯度稀释，以使菌落获得**纯化。

取上述增菌后的不同稀释度的样品，在TSA平板上涂抹，在35-27度18-24小时进行孵育。用无菌镊子在无菌环境下夹起鉴定纸，用记号笔标记以便于定位。将鉴定纸放到TSA平板表面，二者接触30秒到1分钟。然后将鉴定纸转移到无菌的空白皿中，倒置孵育35-37℃、1-4小时。

将另外的TSA平板分为4个象限/板，上述标准菌株分别接种到不同象限中，孵育35-37℃、18-24小时。也用鉴定纸进行转印并孵育，步骤同上。

结果显示，在HiDtect鉴定纸上，各个菌株的实际显现颜色和预期基本一致，即：大肠埃希氏菌-紫色（相符）

金黄色葡萄球菌-金黄色（相符）

鼠伤寒沙门菌/福氏志贺氏菌-无色（相符）

蜡样芽胞杆菌-浅绿色（大菌落）（相符）

单核细胞增生李斯特氏菌 预期是蓝绿色，实际显示为蓝色。

大肠埃希氏菌O157：H7预期为粉紫色，实际为紫色。

传统培养基的鉴定结果如下：

传统培养基进行定量的结果如下：

采用HiDtect方法进行定量的结果如下：

结论：

HiDtect快速鉴定纸DT010能快速鉴定下列微生物：大肠埃希氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌/福氏志贺氏菌、蜡样芽胞杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌。DT010鉴定纸能对食品病原菌快速可靠的检测，在35-37℃孵育1-4小时内可显示出颜色变化。

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DT001  尿道病原菌快速鉴定纸

使用的标准菌株包括：

大肠埃希氏菌——ATCC 9132

肺炎克雷伯菌——NCIM 2706

金黄色葡萄球菌——ATCC 25923

铜绿假单胞菌——NCIM 2036

粪肠球菌——NCIM 2080

使用的培养基包括：

TSA，缓冲蛋白胨水

选择性培养基：麦康凯琼脂，Baird Parker琼脂，牛奶琼脂，Slanetz Bartley琼脂

验证培养基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培养基，西蒙柠檬酸盐琼脂，兔血浆，氧化酶纸片，乙基紫叠氮钠葡萄糖肉汤（(EVB）

流程同上，只不过没有使用鱼制品，直接接种在营养肉汤中。另TSA平板不是四等分，而是五等分，分别接种标准菌株。

观察结果如下：

HiDtect方法，基本相符

传统培养基的方法

HiDtect定量方法的培养反应

传统培养基定量方法的培养反应

结论：

快速鉴定纸DT001可用于快速鉴定下列菌：大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌，DT010鉴定纸能对食品病原菌快速可靠的检测，在35-37℃孵育1-4小时内可显示出颜色变化。

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DT002  沙门氏菌快速鉴定纸

使用的标准菌株包括：

大肠埃希氏菌——ATCC 9132

鼠伤寒沙门氏菌——ATCC 23564

肠炎沙门氏菌——ATCC 13076

使用的培养基包括：

TSA，缓冲蛋白胨水

选择性培养基：麦康凯琼脂，XLD琼脂

验证培养基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培养基，西蒙柠檬酸盐琼脂，尿素琼脂

采用的样品是肉

流程同上。标准菌株也接种到样本肉上，之后进行增菌和稀释。取样是0.1ml。TSA是分成3个象限。

结果如下：

HiDtect方法：

传统培养基方法的培养反应：

传统培养基的定量结果

HiDtect方法的定量结果

结论：快速鉴定纸DT002可用于快速鉴定下列菌：鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌。DT002鉴定纸能对食品病原菌快速可靠的检测，在35-37℃孵育1-4小时内可显示出颜色变化。

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DT008  大肠埃希氏菌双验证的快速鉴定纸

使用的标准菌株包括：

大肠埃希氏菌——ATCC 9132

金黄色葡萄球菌——ATCC25923

培养基包括：

TSA，缓冲蛋白胨水

选择性培养基：麦康凯琼脂，Baird Parker琼脂

验证培养基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培养基，西蒙柠檬酸盐琼脂，兔血浆

参照样品：饮用水

将标准菌株也接种到水样中。TSA平板分成2个象限。其余流程同上。

结果观察：

HiDtect方法

传统培养基方法

传统培养基的定量结果

HiDtect方法的定量结果

结论：快速鉴定纸DT008对大肠埃希氏菌进行了检测。DT002鉴定纸能对食品病原菌作快速可靠的检测，在35-37℃孵育1-4小时内可显示出颜色变化。

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DT011  芽孢杆菌快速鉴定纸

使用的标准菌株包括：

蜡样芽胞杆菌——ATCC 10876

枯草芽孢杆菌——ATCC 6633

苏云金芽孢杆菌——ATCC 10792

培养基包括：

TSA，缓冲蛋白胨水

选择性培养基：MYP琼脂

验证培养基：葡萄糖琼脂

参照样品：

即食食品（大米）

将标准菌株接种到即食大米中，TSA平板分为3个象限，其余同上。

结果观察：

HiDtect
方法

传统培养基方法

传统培养基方法的培养反应（定量）

HiDtect方法的培养反应（定量）

结论：

快速鉴定纸DT011对下列菌进行了测试：蜡样芽胞杆菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌。DT011鉴定纸能对这些食品病原菌作快速可靠的检测，在35-37℃孵育1-4小时内可显示出颜色变化。