用于疫苗生产的Vero细胞

Vero细胞是日本学者Yasumura等于1962年从正常成年非洲绿猴肾分离获得的贴附依赖性细胞系, Vero一词由世界语中的verde(意为绿色的)和reno意为肾脏的)两个词合并而成。Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。

与用作疫苗生产的原代细胞、二倍体细胞和其他一些传代细胞基质相比，Vero细胞具有以下特点:

①来源方便，可连续传代，生长速度快;

②对多种病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高;

③遗传性状稳定，恶性转化程度低，生物安全性较高;

④培养条件要求不苛刻，易于在生物反应器实施大规模培养。

疫苗的接种对象主要是大范围的健康人群，其质量和安全性一直是备受关注的重要问题。疫苗的质量和安全性在很大程度上取决于疫苗的生产方式和过程。血清是一种组分复杂而尚不完全明确的混合物，至少含有1 000种不同的蛋白质，总蛋白量高达60~150g/L，它能为细胞的体外培养提供必要的生长因子、激素、细胞贴附因子和营养成分。

受Vero细胞自身的贴附依赖生长特性和动物细胞培养技术发展进程的影响，本世纪之前的Vero细胞培养及病毒疫苗生产均存在着对血清的依赖。血清组分的复杂性和不确定性，以及其中存在病毒等病原微生物污染的潜在风险，影响着病毒疫苗的生产工艺和疫苗质量。

从病毒疫苗生产工艺角度考虑，血清组分的复杂性和批次间的质量差异增加了病毒疫苗生产的不稳定性和产品质量控制的难度;从病毒疫苗的安全性角度考虑，血清中潜在的病原微生物，如引起牛海绵状脑炎的阮病毒，给疫苗的使用带来了不容忽视的安全隐患阎。由血清使用所造成的细胞培养过程和细胞表达产物安全性的不确定因素增加的现实问题，成为动物细胞无血清培养技术研究和应用的发展动因。

随着动物细胞无血清培养技术的不断进步，为包括Vero细胞在内的动物细胞大规模无血清培养技术的应用提供了必要的技术支撑，无血清培养已成为包括疫苗在内的生物技术药物生产的总趋势问。2010年，美国、欧盟和日本等发达国家全面停止在生物制药中应用血清，FDA停止含血清细胞培养工艺生产的生物技术新药的申报受理。

国外报道用可以用HiMedia生产的SFRE 199-1培养基作为Vero无血清细胞培养基的基础成分，细胞生长较快，状态亦佳。SFRE 199-1是对M199培养基的改良型，开始用于原代狒狒肾(Bak)细胞的生长和维持。

SFRE 199-1添加了胰岛素、丙酮酸钠、硫酸锌，与M199相比提高了精氨酸-盐酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸和葡萄糖的浓度，使其实现活性较大的同时而不产生毒性。SFRE 199 -1还添加了半乳糖，以避免乳酸过度积累，并使pH值在细胞维持期内保持在生理范围。

另外，SFRE 199系列的还有另一款——SFRE 199-2，SFRE 199-1与SFRE 199-2的不同在于，前者含有Hank's盐，而后者所含为Earle's盐。与加胎牛血清的常规培养基比较，细胞生长速率、产量和蛋白容量均相同，均在移植后第6天单层细胞达到充分融合，有报道用不加血清的SFRE-199-2培养牛输卵管峡部上皮细胞和壶腹上皮细胞，体外研究牛的受孕过程。

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