HiMedia培养基的注意事项

HiMedia培养基的注意事项

• 过度加热：

高温和/或长时间加热是pH值漂移、培养基变暗、产生沉淀、凝胶强度差

和培养基质量下降的常见原因。建议所有培养基都应在灭菌前为溶液状态，否则有可能使培养基变暗（美拉德反应）。

（a）无菌培养基的倾注：

应将无菌琼脂培养基（45-50°C）倒入平板中，避免在培养皿的盖子上形成冷凝水。熔化的培养基应均匀混合，无气泡形成，并无菌地倾注无菌培养皿中。18-20ml熔化的琼脂培养基倒入外径90mm的培养皿中，可获得至少为2-3mm的琼脂层。在倾注平板前，确保琼脂表面干燥，避免微生物生长。这可通过将平板在孵箱30-40℃放置15-20分钟来完成。不要过度烘干琼脂平板。

   （b）添加增补剂：

增补剂可能含有危险和有毒物质。遵循标签或说明书上的说明来复溶增补剂。轻轻漩涡混匀。检查是否完全溶解，大多数增补剂包含抗生素或混合抗生素。一旦复溶后，再储存在2-8°C，则增补剂的性能可能不如新鲜复溶的增补剂。 因此，建议使用新鲜配置的增补剂以获得**性能。

（c）加血：

推荐使用去纤维蛋白血制备血琼脂培养基，而非使用含有抗凝血剂的血液。

尽量使用新鲜的血液。如果使用储存的血液（2-8°C，未冷冻），在加入到培养基之前，将血液加热至约35-37°C。

• 配制培养基的存储：

如果在配制当天没有使用培养基，那应该妥善保存在防潮容器中，防止培养基变干。重要的是要注意，除非所配制培养基的稳定性已知，培养基不应存放较长时间。同样，含有琼脂的培养基不应在较高温度下（40-50°C）保存较长时间，因为琼脂趋于结块。建议使用新鲜配制的培养基而不是储存的培养基。包含有β-内酰胺选择因子的培养基活性非常短，因此应在配制后的数天内使用。

琼脂平板应在2-8°C的密封条件下储存以避免失去水分。试管或烧瓶中的液体培养基也应有气密密封。失水会导致培养基中某些物质的沉淀和结晶。配制后的培养基稳定性有限，并且不同培养基的稳定性差异很大。

如果在受控条件下没有特别规定，培养基可以在12°C~15°C下储存数月。培养基不应该储存在0°C以下，因为它会破坏凝胶结构。在接种前，应仔细检查平板是否有污染，培养基倾注是否不均匀或琼脂表面是否有气泡，颜色是否有变化，是否有溶血和体积收缩引起的裂缝。如果平板和试管中的培养基有缺陷，则应丢弃。

• 质量控制：

每个新批次的培养基总是与以前之间通过的同样培养基进行平行测试。对于培养反应，会用生理盐水制备梯度稀释的细菌悬浮液以获得每板50~100CFU的菌落。用于无菌检查的培养基或有特殊应用的培养基，则应根据相应的药典进行生长促进检查。

• 质量控制菌株：

如果培养基要接受质量控制检查，则应同时使用质量控制菌株。可从权威的菌种库如ATCC或其他机构获得。如使用商业菌株，应遵循生产商的建议

进行增菌和养菌。

药典、ISO 11133-2014、《水和废水检查的标准方法》推荐有特定的试验菌株。菌液制备用培养基用于菌株的传代。它可在2-8ºC下储存，最多4周。

• 配制培养基的废弃处理

（i）实验室环境

微生物实验室给未经培训的人员会产生危害风险。因此，微生物实验室应限于那些知道如何安全操作的人员。微生物培养对周围环境的影响也应考虑在内。大多数国家都指定了相应的标准，并对微生物实验室进行了分级。对于最危险的微生物，应在完全封闭的环境下操作。违反这些规定可能会触犯法律。

（ii）人员操作：

对于导致传染病的材料和已接种的培养基的处理，应只有受过微生物产品培训的合格人员才能操作。所有标本和培养物都应妥善处理，并需经高压灭菌后才能弃置。用户应该确保任何使用的机械或设备（和被偶然污染的设备）得到了安全的消毒或灭菌。反复使用的玻璃容器（例如锥形瓶，培养试管，玻璃培养皿）中的培养物必须在高压灭菌器中销毁（在121℃下约30分钟）。高压灭菌器应该专一使用，用于培养基或其他材料灭菌的高压灭菌器不应该用于废弃物的灭菌。

（iii）生物安全：

应该认识到培养基接菌后，会导致微生物大量产生，具有潜在的危害和传染性。因此，必须按照已批准的方法进行安全处理。对于微生物样品的运输和储存，必须严格遵守国家指南。已污染的和未使用的培养基的废弃必须根据地方或国家指南。

• 脱水培养基的安全使用

所有脱水培养基均以细粉或颗粒形态供应。这些产品是用于在实验室开展细菌学工作，不用于人或动物的消费。不应吸入培养基，因为可能刺激上呼吸道。如果出现皮疹，请避免长时间接触培养基。使用干粉培养基时，确保没有产生过多的粉尘。任何残留都应该用足量的冷水清洗。为防止吸入粉尘，建议使用已批准的鼻面罩。每个产品都有材料安全数据表，可查看。

• 危险品和毒性产品的处置（略）

• 急救措施（略）

• 安全检查清单（使用和存储）（略）

• HiMedia包装瓶上的标识（略）