M 199培养基的改良可使疫苗增产

M199是经典的细胞培养基，也常作为疫苗生产用的培养液，用于地鼠肾细胞、原代鸡胚细胞、Vero细胞的大规模培养。这其中，也添加有新生牛血清，水解乳蛋白等。

近年有文献报道，改良的M199比经典的M199的效果更好1。但具体的改良配方并未透露，只提到调整了氨基酸等营养成分的配比。因此，如果在不升高成本的情况下，改用改进后的M199培养基，会带来更好的细胞培养效果和经济效益。

在现有培养基中，SFRE199是值得关注的，它恰好是M199的改良型。它的改进方面主要为：1、升高了葡萄糖和8种氨基酸（精氨酸-盐酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸）的浓度，使其达到促进细胞的**活力，而又不产生毒性；2、加入了硫酸锌、丙酮酸钠和鱼精蛋白锌胰岛素。3、降低了硝酸铁、黄嘌呤和碳酸氢钠的浓度。4、加入了半乳糖。实验发现，半乳糖可使细胞培养液中的乳酸降低54%3，使pH保持稳定。

SFRE199最初是用于原代狒狒肾细胞的培养3，后来也有用于牛输卵管峡部上皮细胞和壶腹上皮细胞的培养。其特点是，都只用了SFRE199，而没有添加血清，细胞的培养效果仍然理想。值得注意的是，原代细胞较细胞系难培养，因此，SFRE199中升高的氨基酸和葡萄糖浓度，显然更有利于原代细胞的生长。同时，上述细胞都属于泌尿生殖系细胞。Vero细胞、地鼠肾细胞与上述细胞的起源相同，可以想见，SFRE199也同样非常有可能适用于这些疫苗生产细胞的培养。事实上，国外在1992年时即有报道3，用SFRE199作为化学限定培养基的一部分，用于Vero细胞的静置培养和悬浮培养，只不过还添加了BSA和血清替代物等，并且发现，SFRE199培养的效果**。而在实际应用中，用SFRE199替代M199，同时降低牛血清的用量，也是非常有可能的，从而降低生产成本。

在SFRE199对M199的改进中，值得注意的是添加了硫酸锌和胰岛素。有研究者发现，如果在SFRE199中去除这2个成分，则细胞二倍分裂时间延长，细胞不能很快长满，若含有这2种成分，则该培养基支持生长的能力相当于标准对照血清培养基3。

因此，如果疫苗生产企业目前用的培养液是M199，则推荐更换为SFRE199，因为生产成本没有增加，而细胞生长和病毒滴度却可有一个理想的结果。

参考文献

1. 陈嘉雯，等. 改良M199培养基在Vero细胞培养中的适用性. 中国生物制品学杂志. 2014, 27(1): 76-77

2. 吴长安. 无血清化学限定培养基对原代细胞的培养及其对病毒的敏感性。《国外医学.生物制品分册》. 1981年04期

3. Jack Litwin. The growth of Vero cells in suspension as cell-aggregates in serum-free media. Cytotecnology 10:169-174,1992