单增李斯特菌检测方法的改进

在熟肉制品，即食生肉制品、干酪、再制干酪以及饲料中，常需检查单增李斯特菌的存在，因为这些地方也是。李斯特菌属有七个菌种，其中单增李斯特菌为致病菌，和人类关系最为密切。但单增李斯特菌的检验较为费时，前期增菌、分离外，后期还要做鉴定。目前，李斯特菌显色培养基已得到普遍应用，并发现优于PALCAM平板，因为后者无法区分是单增李斯特菌与英诺克李斯特菌，但前者可以。但目前市面上大多数的李斯特菌显色培养基也存在不足，它在分离鉴别出单增李斯特菌的同时，无法区分出单增李斯特菌与伊氏李斯特菌，也就是说，二者菌落形态均完全相同。

实际在检测单增李斯特菌的过程中，曾有新疆疾控中心的人员发现，单增李斯特氏菌与伊氏李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌误判现象突出2。这三种常易混淆的李斯特菌在葡萄糖、麦芽糖、MR-VP、甘露醇、七叶苷方面的生化反应均一致，溶血反应可区分英诺克与单增。木糖、鼠李糖反应可区分伊氏与单增。但溶血反应对操作技巧要求较高，同时，木糖、鼠李糖反应也包括在生化鉴定试剂条中，容易导致重复操作，比较耗时。而要进行生化试剂条的鉴定，还需挑菌落后进行纯培养。

在这里，笔者给出一些不同的方案，可省却后续复杂的鉴定步骤，供有关人员参考。一是在二次增菌后，直接使用一款单增李斯特菌验证培养基（HiMedia生产，货号MV1552）来分离鉴别。该培养基是依据磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C（PIPLC）活性和α-甲基-D-甘露糖苷的发酵。磷脂酶C是一种重要的毒力因子，只有单核细胞增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌具有。单增和伊氏李斯特菌水解培养基中的底物，菌落周围产生不透明的光晕。单增和伊氏的鉴别是通过α-甲基-D-甘露糖苷的发酵。单增为阳性，菌落有黄色光晕。伊氏则为阴性。该培养基含有鼠李糖，酚红为指示剂。其培养反应如下：

图中标号分别为1. 单核细胞增生李斯特氏菌、2. 伊氏李斯特菌、3. 英诺克李斯特菌、4. 斯氏李斯特氏菌

第二个方案是采用国标推荐的李斯特菌显色培养基（可使用HiMedia生产的，货号MV1540，符合国标的标准，质量可靠，价格低于同类进口产品，可降低检测成本），培养反应如下：

但该类显色培养基无法区分单增与伊氏李斯特菌，进一步鉴别可直接使用李斯特菌生化鉴定试剂盒（内含12种生化反应，HiMedia生产，货号KB0012A）。该试剂盒已包含木糖和鼠李糖的发酵反应。产品外形如下图：

如不想用生化鉴定试剂盒，可用另一款改良型李斯特菌显色琼脂（货号M1417），它可区分单增与伊氏李斯特菌，如下图：

35-37°C 培养24-48小时后，单增李斯特菌（左）——蓝绿色菌落，带黄色光晕。伊氏李斯特菌（右）——蓝绿色菌落，无黄色光晕。但要注意，这款显色培养基无法区分单增与英诺克李斯特菌。如果使用一款显色培养基同时区分单增、伊氏和英诺克，还可采用单增李斯特菌快速鉴别琼脂（货号M1924）。其培养反应如下图所示：

其具体菌落特征如下：

参考文献

1. 苏静  于烽  刘艳  远雪梅  马鑫. 单增李斯特氏菌国家标准检验方法的验证与探讨. 疾病预防控制通报. 2015-06-24