危险的耐药致命菌—粘菌素耐药菌

粘菌素（Colistin）又称多粘菌素，属于抗革兰氏阴性菌药物的一种，临床上主要用于治疗革兰阴性菌感染，特别是绿脓杆菌和大肠杆菌引起的各种感染，如呼吸系统感染、腹膜炎、胆管感染、尿路感染、烧伤感染、眼角膜感染及败血症等。

粘菌素存在副作用，包括肾毒性和耳毒性（1,2）。国内外科研人员对粘菌素进行了更广泛更深入的研究。例如，中国鉴定了由mcr-1 pEtN基因引起的质粒介导的粘菌素（COL）耐受（3）。而最近的临床数据还表明，如果采取某些预防措施，粘菌素的使用是可以被接受的（4）。

《抗菌药物临床应用指导原则(2015年版)》中指出，近年来，多重耐药革兰氏阴性菌日益增加，碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌、多重耐药铜绿假单胞菌等对多粘菌素类药物耐药率低，因此多粘菌素药物重新成为被选用的药物之一。

粘菌素对铜绿假单胞菌的抗菌作用为显著，对大肠杆菌、沙门氏菌、痢疾杆菌、流感杆菌、产气杆菌及肺炎杆菌等也有良好的作用。但随着抗生素的滥用，耐粘菌素的细菌被不断发现并报道，其在世界范围内蔓延并引起人类感染甚至死亡。

在临床或试验中，分离检测粘菌素耐药菌需要使用粘菌素耐药菌显色培养基。HiMedia公司生产的粘菌素耐药菌显色培养基（货号：M2094，品名：HiCrome™ Colistin Resistant Agar Base）特异性高、灵敏度高，用于快速分离、鉴定革兰氏阴性粘菌素耐药菌。而且，经分离后的菌种还可用作后续进一步试验。

M2094中的酸水解酪蛋白提供氮源和碳源化合物、长链氨基酸、硫和其他必需营养素。显色混合物有助于颜色鉴别。

加入添加剂FD355,35-37℃培育18-24小时后，显色底物被粘菌素抗性大肠杆菌产生的β-D-半乳糖苷酶特异性裂解，产生粉红色至紫色的菌落。粘菌素抗性肺炎克雷伯菌裂解另一种显色底物，产生金属蓝色的菌落。假单胞菌产生的无色菌落可能含有轻微的绿色色素。来自蛋白胨的苯丙氨酸和色氨酸有助于检测色氨酸脱氨酶活性，指示变形杆菌、摩根菌和普罗维登西的存在，它们菌落呈现褐色。

其中耐粘菌素大肠杆菌、耐粘菌素肺炎克雷伯菌、耐粘菌素铜绿假单胞菌接种量为50-100CFU，在培养基上旺盛生长且回收率≥50％.粘菌素敏感的革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌接种量为10³CFU，在培养基上生长受抑制且回收率为0％.

图1：HiCrome粘菌素耐药菌显色培养基

M2094被用作筛选培养基，符合欧盟体外诊断医疗器械注册资格（欧盟IVDD），分离后的菌株应遵循《美国临床和实验室标准协会》（CLSI）指南，进一步检测分离菌株对粘菌素的敏感性。

参考文献

1. Cheng YH, Lin TL, Pan YJ, Wang YP, Lin YT, Wang JT.2015. Colistin resistance mechanisms in Klebsiella pneumoniae strains from Taiwan. Antimicrob Agents Chemother 59:2909–2913. doi:10.1128/AAC.04763-14.

2. Lim LM, Ly N, Anderson D, Yang JC, Macander L, Jarkowski A, Forrest A, Bulitta JB, Tsuji BT.2010. Resurgence of colistin: a review of resistance, toxicity, pharmacodynamics, and dosing. Pharmacotherapy 30:1279–1291. doi:10.1592/phco.30.12.1279.

3. Liu YY, Wang Y, Walsh TR, Yi LX, Zhang Retal. Emergence of plasmid-mediated colistin resistance mechanism MCR-1 in animals and human beings in China: a microbiological and molecular biological study. Lancet Infect Dis 2016;16

4. Falagas ME, Rafilidis PI.2009. Nephrotoxicity of colistin: new insight into an old antibiotic. Clin.Infect. Dis. 48:1729-1721.

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