HiCrome显色培养基与常规培养体系分离鉴定泌尿病原体的对比及评价

说明：本文根据以下文献编译

原文：Laila Akter,Rezwana Haque, and Md. Abdus Salam. Comparative evaluation of chromogenic agar medium and conventional culture system for isolation and presumptive identification of uropathogens. Pak J Med Sci. 2014，30(5): 1033–1038.

尿液是临床实验室最常见的培养样本。本实验比较了HiCrome-UTI显色琼脂（货号：MV1353，品名：HiCrome UTI HiVeg Agar，HiMedia公司生产）与血琼脂（BA）和麦康凯琼脂（MAC）的性能，对尿液中的细菌进行分离和初步鉴定。

尿路感染是重要的临床疾病，全球范围内大量的门诊病人和住院病人都与尿路感染有关，尿液则成为了最常用的培养样本。

尿路感染的病因诊断，通常需要在标准琼脂培养基上进行定量的培养，尿样本中只有20%到30%的细菌会显著生长。主要的致病因子是大肠杆菌、克雷伯氏菌属、单胞菌属、变形杆菌属、肠球菌属和葡萄球菌属等。

传统培养基，如血琼脂（BA）和MAC琼脂常被一起使用，以增加实验的准确性。

血琼脂作为一种浓缩培养基，可以支持大多数泌尿病原体的生长，但其在细菌鉴定方面的性能非常差。同样，在Mac和Cled琼脂上也可以区分乳糖发酵菌和非发酵菌，但进一步的物种鉴定需要进一步培养或不同的生化试验，延长了鉴定时间，增加了成本。此外，它们促进病原体生长的能力有限，并不适合作为理想的初级分离方法。

摘要：

试验方法：对2012年1月至12月在孟加拉国拉贾希市伊斯兰堡医学院附属医院采集的443例尿样本进行培养。将脓细胞≥5/hpf的尿液标本同时接种到血琼脂（BA）、MAC琼脂和HiCrome琼脂（CA）培养基上，并在37℃下进行培养过夜，比较不同培养基的分离率和细菌种类的推测鉴定。

试验结果：共培养出189个（42.67%）阳性平板上的199株细菌，其中单微生物培养179株（40.40%），多微生物培养10株（2.26%）。HiCrome-UTI琼脂和血琼脂培养基生长率均为100%，而MAC琼脂培养基的生长率为151（75.88%）。作为尿液培养基，HiCrome UTI琼脂（97.49%）的推定鉴定率明显高于MAC琼脂（67.34%）（P<0.001）。在199个分离菌株中，大肠杆菌是从118个（59.30%）样本中分离出的主要泌尿系病原体，其在CA、MAC和BA上的鉴定率分别为95.76%、93.22%和5.93%。所有10（100%）个多微生物在CA上旺盛生长且肉眼可见，而在每个BA和MAC上只有1个（10%）。

试验结论：与传统培养基相比，HiCrome UTI琼脂用作尿培养基的分离率和鉴定率较高。它在促进多微生物生长，以及易于通过独特的菌落颜色快速识别方面的特征是****的。

正文：

显色琼脂（CA）培养基越来越多地被用作一种多用途的原代培养工具，以更好地分离细菌种类并从临床标本中鉴别。7种生色底物被纳入这些培养基中，这些底物被具有特殊功能的细菌酶分解而显色。这种选择性培养基不仅支持所有泌尿病原体的生长，而且还可以更容易地诊断混合细菌感染。在一些研究中，将显色培养基与传统培养基进行比较，其优点包括减少鉴定时间、减少工作量、更容易识别混合生长微生物，以及减少细菌鉴定的生化试验数量等。所有这些因素都可直接降低成本。

HiCrome UTI琼脂是一种显色培养基，有助于快速分离和鉴别大多数泌尿病原体，包括混合微生物的各种物种。大肠杆菌菌落是最常见的泌尿病原体，由于其含有β-半乳糖苷酶，裂解显色底物而呈粉红色，在该培养基上被明确的鉴定，无需进一步的生化试验。产生β-葡萄糖苷酶的菌株，如肠球菌和沙雷雷克雷伯氏肠杆菌群，由于葡萄糖苷水解包含在培养基中的显色底物而形成蓝色菌落。同样地，培养基中的色氨酸可用于检测变形菌群。变形菌群生产色氨酸脱氨酶，裂解色氨酸后呈现弥漫的棕色。假单胞菌属产生无色菌落，腐生菌产生白色菌落。某些后续的鉴定试验，如过氧化氢酶、氧化酶和吲哚试验，可直接从HiCrome-UTI琼脂上的菌落中进行，也可以不用传代到另一种基本培养基上进行抗生素敏感性试验。

方法：

样本收集与培养基见前。

尿液培养：所有尿液样本均无菌接种到HiCrome UTI琼脂、血琼脂和MacConkey琼脂培养基上，使用28g的校准金属丝环，内径3.26 mm，含0.004 ml尿液。平板在37℃有氧培养，过夜培养后，通过菌落计数（100个菌落的生长等于10⁵个菌落形成单位（cfu/ml尿），检查有无明显的细菌尿症）。

细菌感染的显著性标准：有症状的妇女体内有大于10⁵ cfu/ml的非大肠菌群或大于10² cfu/ml的大肠菌群；有症状的病人体内细菌含量大于10³ cfu/ml。

鉴定：根据制造商描述的菌落形态和颜色，在HiCrome UTI琼脂上进行细菌生长的鉴定。Mac琼脂和BA上的菌落也根据每个泌尿病原体的菌落特征进行鉴定。使用标准鉴定方案（如革兰氏染色、运动试验、过氧化氢酶试验、凝固酶试验、氧化酶试验和其他适用于菌株的相关生化试验）对菌株进行最终鉴定。

统计分析：所有数据均输入社会科学统计包（SPSS）16.0版。对分类变量（如细菌类型、分离率、假设鉴定和培养中多微生物生长率）生成了百分比频率。采用卡方检验（x2）计算P值，比较CA和MAC的假定识别率。

结果：

在443份尿液培养中，189份（42.67%）有明显的细菌生长，254份（57.33%）无生长。培养阳性标本中，单菌生长179例（40.41%），两种菌混合生长10例（2.26%）。有118例样本（59.30%）分离出大肠杆菌，其次是腐生葡萄球菌38例（19.09%）、肠球菌23例（11.56%）、克雷伯氏菌11例（5.53%）、假单胞菌4例（2.01%）、变形杆菌3例（1.51%）和肠杆菌属2例（1.00%）。

Hicrome UTI琼脂和血琼脂培养基均支持100%细菌生长，而Mac琼脂培养基中有151例（75.88%）细菌生长。

根据原代培养板上的菌落特征对199株细菌进行推测性鉴定，Hicrome UTI琼脂上可鉴定194株（97.49%），Mac琼脂上可鉴定134株（67.34%），BA上可鉴定73株（36.68%）。Hicrome UTI琼脂的推测鉴定率明显高于作为主要尿培养基的Mac琼脂。

所有10例（100%）混合菌群仅在Hicrome-Uti琼脂培养基上被明确鉴定。而除大肠杆菌和变形杆菌属的单一菌属外，所有其他混合细菌均不能在Mac和血琼脂培养基上生长及鉴定。

对尿液中的细菌分离及鉴定是一项耗时的工作，在使用传统的培养基如血琼脂、MAc琼脂或Cled琼脂时需要大量的时间。与之相反，Hicrome-UTI琼脂培养基的分离率较高，对泌尿病原体的鉴定具有统一的鉴定标准，因此比传统培养基优越得多。由于无需下一步的细菌鉴定试验，显色培养基大大减少了实验室工作量，同时具有较高的培养鉴定效率。

血琼脂是一种浓缩培养基，Hicrome UTI琼脂也含有所有必需的营养素，以支持可能的泌尿病原体的生长，这就是为什么所有的分离株都可以在这两种培养基上生长的原因。

就细菌的初步鉴定而言，与传统培养基相比，HiCrome UTI琼脂上鉴定的细菌种类比例明显较高，可在显色培养基上观察每一种细菌独特的菌落颜色，特别是针对大肠杆菌、克雷伯氏杆菌、肠球菌和肠杆菌属。显色培养基也能鉴定一些非发酵乳糖的大肠杆菌，而MAC琼脂则不行。此外，Hicrome UTI琼脂还具有限制变形杆菌、克雷伯氏菌和大肠杆菌粘液菌株等分离株扩散生长的优点，因此，当存在混合菌群时，显色培养基能够更高效地检测尿道病原体。

HiCrome UTI琼脂有较高的分离率，可特异性识别混合菌群，从而使结果评估更准确。由于BA和MAC琼脂在菌落分离方面的局限性，其对混合菌群的鉴定率非常低。而HiCrome UTI琼脂更有助于具体识别尿液样本中的致病菌，从而减少使用不必要的抗生素。此外，与传统培养基相比，HiCrome UTI琼脂费时更少。

本研究的总体结果表明，与传统培养体系相比，Hicrome UTI琼脂提供了一种更高效、省时的方法，能够可靠地鉴定大多数泌尿系统病原体，并分离原代培养皿中的混合细菌。它简化了尿液微生物培养步骤，减少了技术人员的工作量，能够显著的提高鉴定效率以及降低成本。