新型『无动物源』细胞培养基，疫苗生产专用

在生物制药领域，动物源原料存在安全风险，针对此风险，国际各大药典制定了相关规范：

如《欧洲药典》（EP8.0,2014)第5.2.8章强调了医用产品的生产应优先考虑使用“非TSE相关动物物种材料”或“无动物源材料”，使安全风险最低化。

《美国药典》也明确规定，为减少TSE传播的潜在风险，建议使用无动物源生产原料代替动物源原料。

在疫苗生产领域，无动物源培养基的使用不仅可以使安全风险最小化，而且存在诸多优点。

疫苗生产用『无动物源』培养基的优点

生产疫苗使用的动物源细胞培养基，具有潜在的安全风险，且存在批间差异，审批手续繁琐等问题。

而无动物源培养基有着极大地优越性：

1.无动物源培养基完全避免了因原材料导致接种者感染外源病毒的风险

2.防止了动物源原料带来的病毒干扰目标病毒

3.无血清的配方，使细胞悬浮培养更容易，减少细胞成团，利于疫苗厂大规模悬浮培养

4.无动物源配方，批间差异更小，利于工业化稳定生产

5.原料无动物源成份，使疫苗审批的申报流程更简便

6.无动物源培养基，在海关进口时，手续更简便，保证原料更快捷地能及时供应

无动物源培养基已被全球疫苗生产厂家大量使用，其中一款Himedia公司研制的新型的CELLin1™培养基，更是因其应用面广，细胞培养效果佳，病毒产量大，而表现上佳。

CELLin1™培养基适用的疫苗品种范围

CELLin1™适用于以下疫苗生产常用的5种细胞

CELLin1™作为一种

新型『无动物源』培养基，

专门用于培养上述五种细胞，

且具有非常好的培养效果。

CELLin1™『病毒生产能力』和『促细胞生长能力』

验证报告

1.实验信息

本实验使用CELLin1™无动物源培养基与竞品OptiPRO™SFM (Gibco)无动物源培养基分别培养细胞。

实验选用的细胞系：

MDBK细胞，牛疱疹病毒1型(BHV-1)

MDCK细胞，流感病毒A

PK-15细胞，猪圆环病毒2型（PCV）

Vero细胞，狂犬病毒

B.实验观测指标

1.病毒产生能力（96孔板内进行）

1.1生长曲线：检测培养基维持细胞生长和达到高细胞密度和高活力的能力

1.2病毒滴度：检测培养基支持病毒在宿主细胞内繁殖的能力

2.种子制备和细胞存储

宿主细胞系的存储和种子制备是病毒疫苗生产前的2个主要步骤。通过连续传代，检测CELLin1™支持宿主细胞生长的能力。

C.实验结果

MDBK细胞

采用CELLin1™培养MDBK细胞，

BHV1病毒滴度用TCID50 (108）表示（下图）。

数据表明，CELLin1™培养的细胞少反而得到了更大的病毒产量，CELLin1™培养的MDBK细胞更健康、更有活力，产毒能力更强。

MDBK细胞在T175培养瓶中，

用CELLin1™或竞品培养基培养和连续传代。

当细胞长至70-80%时进行传代（下图）。

CELLin1™连续五代培养的MDBK细胞数量远高于竞品，而且细胞生长更稳定。

MDCK细胞

采用CELLin1™培养MDCK细胞，

流感病毒A滴度用TCID50 (108）表示（下图）。

数据表明，CELLin1™培养的MDCK细胞产毒能力更强。

连续五代培养，CELLin1™培养的MDCK细胞数量远高于竞品，对细胞的支持非常稳定。

PK-15细胞

采用CELLin1™培养PK-15细胞，

猪圆环病毒滴度用TCID50 (108）表示（下图）。

数据表明，CELLin1培养基更适合PK-15细胞生长。

PK-15细胞在T175培养瓶中，

用CELLin1™或竞品培养基培养和连续传代。

当细胞长至70-80%时进行传代（下图）。

连续五代培养，CELLin1™培养的PK-15细胞数量均高于竞品，对细胞的支持非常稳定。

Vero细胞

采用CELLin1™培养Vero细胞，

狂犬病毒滴度用TCID50（108） 表示（下图）。

数据表明，CELLin1™培养的细胞少反而得到了更大的病毒产量。CELLin1™培养的Vero细胞更健康、更有活力，产毒能力更强。

Vero细胞在T175培养瓶中，

用CELLin1™或竞品培养基培养和连续传代。

当细胞长至70-80%时进行传代（下图）。

通过连续五代培养，与竞品的细胞密度对比，CELLin1™对Vero细胞的支持非常稳定。

D. 结论

CELLin1™支持Vero、PK-15、MDCK、MDBK细胞生长和病毒繁殖的能力已得到了验证。

在这些细胞系中，CELLin1™显示出**的病毒生产能力和促细胞生长能力。

因而，CELLin1™可有效的作为通用培养基用于Vero、PK-15、MDCK、MDBK细胞的病毒生产。

CELLin1™的配制方法

CELLin1™是一款化学限定的

疫苗生产用『无动物源』培养基，

分为A、B两个部分。

A部分为基础培养基，

呈白色至浅粉色均匀粉末，2-8 ℃避光保存。

B部分为生长添加剂，

呈无色透明溶液，-20 ℃保存.

1L规格的CELLin1™配制步骤

取11.5g A部分用900ml组织培养级别水重悬，持续搅拌直至粉末完全溶解。不要加热。

加入2.70g碳酸氢钠粉末或36.0ml 7.5％碳酸氢钠溶液配制1升培养基。搅拌至溶解。

加入584mg的L-谷氨酰胺粉末或加入20mL浓度为200mM的L-谷氨酰胺以制备1升培养基。搅拌至溶解。

用1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH将pH调节至低于理想pH值0.2-0.3单位水平，因为pH值在过滤后趋于上升。

用组织培养级别水将体积补足至1000ml。

立即用孔径≤0.22μM滤器过滤培养基以灭菌。使用正压而非真空抽滤，以减少CO2的丢失。

在2-8℃解冻生长添加剂（B部分）。

在A部分和B部分放入生物安全柜之前，对两部分瓶子表面喷洒异丙醇进行消毒。

在无菌条件下将B部分全部内容物转移至1L基础培养基（A部分）中，轻轻混合。

配置完全的培养基可直接使用。储存时，完全培养基在2-8℃下的保质期为8周。

     注：在使用过程中，还需要细胞的无血清驯化。

CELLin1™产品信息

品名：CELLin1™化学限定疫苗生产用无动物源成分培养基

英文名：CELLin1™ Chemically defined, Animal Component Free Virus Production medium

货号：SFM036AP

生产商：HiMedia Laboratories

生产地：印度

组成：

A部分为基础培养基，干粉，2-8℃保存

B部分为生长添加剂，液体，-20 ℃保存

内毒素含量：小于1EU/ml

市场价：

1L/套    ￥950

10L/套   ￥8000

厂家介绍:

HiMedia   Laboratories公司是世界**的培养基生产厂家。HiMedia公司总部位于印度，50年致力于微生物培养基和细胞培养基的研发生产，在制药等工业生产中被广泛应用，其产品行销全球140多个国家。尤其是HiMedia公司的非动物源培养基，在国际上占绝对领先地位。

HiMedia公司生产的培养基都具备

WHO GMP、ISO9001、

ISO13485质量管理体系认证

和CE、FDA注册登记，

能更好地应用于工业化生产。

2019年，HiMedia公司的CELLin1™产品正式进入中国，由北京缔一生物作为总代理。北京缔一生物被中国生物界誉为值得“持续信赖的供货商”，在细胞培养的工业化生产领域有着专业的技术背景，为国内疫苗生产（如流感疫苗，禽流感疫苗，猪蓝耳疫苗等）提供了有力的帮助和支持。

现今我们引入CELLin1™给科研人员和工业药厂，希望能帮助药厂进一步发展，使我国疫苗生产领域能迈上一个全新的高度！