支原体qPCR检测的结果诠释

支原体qPCR检测不仅用于细胞培养的支原体筛查，也用于生物制品行业的放行检测，但前提是要有方法验证。

无论是否遵循药典，支原体qPCR检测的结果判定都需要一定的标准。下面小编结合德国MB厂家的支原体qPCR说明书及相关文件，给予进一步的阐释。

一、荧光检测通道的结果诠释

用MB公司的qPCR试剂盒检测时，qPCR仪的FAM通道检测支原体荧光信号，HEX通道检测内控对照（简称IC）的荧光信号（如没有HEX通道，可用VIC通道）。IC是用于监测qPCR反应是否正常。对于这两个通道，Ct＜40为阳性结果。Ct≥40为阴性结果。支原体DNA和IC存在信号的竞争性抑制。

在阴性对照和阳性对照均结果正常的前提下，根据FAM™通道和HEX通道的检测结果，可判别样品是否有支原体污染。具体见下表：

表1. FAM™通道
(支原体) 和HEX™ (IC) 通道的结果诠释

需要说明的是：

内控对照可在支原体DNA抽提时加入。如果结果无效，则说明抽提失败，或者qPCR存在抑制。如果内控对照是在qPCR反应时加入，则说明qPCR存在抑制。

二、对照与样品的结果诠释（适用于符合EP/JP的检测）

对于遵循EP/JP的检测，具体数据诠释见表2。

表2.结果判定的前提是：qPCR检测试剂盒符合EP/JP的要求。

三、MB公司支原体qPCR试剂盒(经典法)

德国MB公司的支原体qPCR检测试剂盒(经典法)(英文名：Venor®Gem qEP)经过厂家全面的方法验证，符合欧洲药典/日本药典要求，适合细胞治疗，CAR-T，抗体药、疫苗等临床项目申报和质检。

需注意样本要先做DNA抽提，再进行qPCR检测。MB还提供用于PCR/qPCR方法验证的配套的支原体10CFU、100CFU菌株标准品、特异性验证用支原体基因组DNA和细菌基因组DNA、支原体DNA绝对定量标准品（基因组拷贝数经严格标定）。

四、德国MB公司介绍

德国MB公司，全称Minerva Biolabs，是世界**的微生物污染控制公司，成立于1999年，总部位于德国柏林。

公司创始人来自于全球闻名的罗伯特•科赫微生物研究所。

二十年来，MB公司专注于微生物污染检测与清除，

特别是支原体和军团菌的技术和产品，在世界上遥遥领先。

1.自1999年起即研发细胞培养和生物药工业用QC检测试剂

2.配备生物安全二级实验室

3.GMP级洁净车间生产

4.世界**的支原体PCR检测试剂供应商

5.IOM和PDA成员

6.ISO 9001和ISO 13485认证

注：IOM全称Institute of Medicine

PDA全称Parenteral Drug Association

2007年，上海威正翔禹生物科技有限公司作为MB公司的全国总代理，将支原体检测防控的优秀产品引入中国。十几年来，不断为中国生物研究实验室，以及众多生物制药企业，提供了完整高效的支原体等微生物检测及祛除解决方案。

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