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血清使用小技巧 | 如何保证血清活性?解冻和储存方法很重要!

2021-09-23 11:06来源:威正翔禹|缔一生物

刚到货的血清应该怎样储存?

血清到底要怎样解冻才能保证活性?

血清在4℃冰箱能放多久?


作为一名细胞培养大户,你是不是经常会纠结上面这些问题?毕竟血清这种金贵的东西,可得好好珍惜,一个不小心,就可能导致实验失败,免不了要被导师责备。


那这些问题到底应该怎样解决?有没有标准答案?身为一个资深的代理商,关于血清的储存和解冻问题我们可是有好好研究过的。

如果你也存在同样的疑惑,那就请接着往下看吧。


Notice


常规储存


首先,刚到货的血清,趁着它还冻手,赶紧放进-20℃冰箱中,避免反复冻融。当然,如果你的课题组不差钱,-80℃冰箱空间充足,把血清储存进去也是没有问题的。


稳了



Notice


如何解冻


很多同学会说,不就是解冻血清嘛,这题我会!



放4℃过夜


emmm……怎么说呢,直接在4℃冰箱里过夜融化的方法,虽然很多人在这么用,但还是有一些潜在的风险的。

我们都知道,在血清这种混合物中,融化速度:蛋白质等干物质>水这类溶剂,所以蛋白质会率先溶解析出,而水还是结成冰的状态,导致瓶子中间会出现一根透明的冰柱,而周围则会呈现上黄下红的分层浑浊液的状态,在使用过程中很容易引起沉淀、混合不均匀、局部浓度过高等问题,影响细胞生长。

更重要的一点是,血清中珍贵的生长因子等活性物质,它们在解冻过程中,有着与细胞复苏类似的经历,都需要快速解冻才能最大程度地保留生物活性。显然,4℃过夜这样的长时间处理,很有可能会导致一部分「营养成分」的损失,影响细胞生长。


所以,为了更好地保留血清中的活性成分,使细胞培养更稳定,我们推荐使用三步法溶解,具体方法见下表,有需要的同学可以截图保存。

如果是储存在-80℃的血清,则需提前几天先转移至-20℃冰箱中(至少24小时),再使用三步法溶解,避免温差过大使血清失活。



注:此方法国际通用,适用于所有培养基,在水浴过程中,血清的平面要完全浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动瓶身,使血清混匀,但摇动中尽量不要产生泡沫!


彻底解冻血清后,可以根据实验需求,将其分装,保证每一份够一次使用量即可,比如:25ml/管、50ml/管等。密封好后赶紧放回-20℃冰箱继续储存。需要配制培养基的时候,再从-20℃冰箱中取出一管来解冻使用(最好能全部配成培养基,不要有剩余),可以有效避免反复冻融的问题(遵循现用现配、现配现解冻的原则)。配好的培养基可以放到4℃冰箱进行储存。


Notice


4℃存放时间


看到这里,问题又来了,配好的培养基,或者剩下的那一点点血清,能在4℃冰箱里放多久呢?

先给出我们认为比较合理的答案,再来解释原因:


7


一般情况下,已经解冻的血清,无论是配成完全培养基还是在冰箱里备用,不要超过一周(7天),原因也很简单,存放太久,生长因子等物质容易失活,而且比较容易受到污染,影响实验结果。


不知道今天这期内容有没有解决大家的疑惑,无论是国产还是进口血清,都不算便宜,这么贵巴巴的试剂,还请小心使用,让它们的功效最大化,可不能让银子白花!



Notice


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