支原体祛除剂使用攻略

支原体在自然界广泛存在，尤其可以寄生于人、哺乳动物、植物、昆虫等物种。

人的口腔、鼻腔、皮肤、呼吸道等均可携带支原体，支原体可以说是无处不在，在细胞实验过程中，操作稍有不慎，造成细胞支原体感染的风险就大大增加。

在细胞间里，支原体对细胞培养的污染风险不容忽视。

首先细胞感染支原体早期没有显著表现。等到实验人员发现细胞异常了，此时细胞基本已经“病入膏肓”，感染十分严重了。

其次，常规的抗生素对支原体无效。一旦发生污染，支原体会影响细胞基因表达和营养代谢改变，严重干扰实验结果（包括细胞转染和病毒包被）。

因此，支原体污染对细胞培养影响重大，一定要重视起来！

如果培养的细胞发生了支原体污染的情况，我们首先建议大家丢弃被污染的细胞，并进行彻底的消杀。

如果细胞很重要，不能丢弃，那么推荐使用专业的支原体祛除试剂，既安全，又高效（毕竟甲醛熏蒸、次氯酸钠、酒精这些东西，既容易对实验人员造成损害，效率也比较低）。

以支原体祛除剂Zell Shield®为例，进行说明。

Zell Shield®是一种复合抗生素类产品，加入到细胞培养基中，通过阻止支原体、真菌、霉菌、致命病菌增殖过程中DNA及蛋白的合成，有效抑制微生物的增殖，对大多数革兰氏阳性和阴性细菌、霉菌、酵母、原虫也同样有效。

Zell Shield®适合如下两种情况：

1）培养的细胞面临支原体的高污染风险，尤其是取自生物有机体的原代细胞。这时建议在培养基中加1%的Zell Shield®。

2）发现细胞已被支原体污染，而不愿意丢弃（如已转染，已经体外刺激或已费力扩增的细胞），希望继续培养，这时可采用下面的“悬浮冲洗法”进行支原体的祛除。

对于非常珍贵的细胞或不易获得的生物样品（如细胞种子），发现有支原体污染，希望挽救。这时我们推荐使用MB公司的Mynox®或Mynox Gold®进行支原体的祛除。

Zell Shield®的用法如下：

1）常规使用

Zell Shield®为-18℃避光保存。使用前，建议融化分装。避免反复冻融。

Zell Shield®按1:100直接加入到新鲜配制的培养基。例如：500ml培养基中添加5ml Zell Shield®，混合后在2~8℃保存可至少4周。37℃进行培养时，最多7天需要更换新的含有Zell Shield®的培养基，以获得**的保护。

说明：Zell Shield®在培养基过滤前或过滤后加均可。如果培养基尚未无菌过滤，可在加入Zellshield®后再进行无菌过滤。

一般情况下，使用了Zell Shield®，就不必再额外添加双抗了。

2）悬浮冲洗法（适合已有支原体污染的细胞）

约98％的支原体存在于细胞表面和细胞间隙。细胞传代前，用干净的PBS悬浮冲洗3次，就能把70%以上的支原体冲洗下来，再通过低速离心，弃上清，即可祛除大部分支原体（离心后细胞沉淀，冲洗下来的支原体在上清中）。再继续用含1%Zell Shield®的培养基持续培养。细胞再连续传代3次，每次都用PBS对细胞进行悬浮冲洗，并用含1%Zell Shield®的培养基培养（见下图），即可逐渐祛除细胞中的支原体。

另外，需要说明的是ZellShield®含有氟喹诺酮类药物，可与其他抗生素联合使用，作为耐药性标记。其他抗生素成分不用作耐药性标记。