原代细胞培养小技巧（二）

原代细胞培养是细胞实验中较为重要的一环，同时该实验也具有一定的难度，需要掌握一些小技巧，才能更快上手、更好操作、更不容易“翻车”，今天我们就来一起总结一下，原代细胞培养，都有哪些注意事项。

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常见的原代细胞类型

上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、黑色素细胞、神经元、星形胶质细胞、肝细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、成骨细胞、肌细胞、软骨细胞、脂肪细胞、滑膜细胞、毛细胞、血细胞、干细胞。

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原代细胞的优缺点

原代细胞VS细胞系

能够培养的细胞系，已经获得了通过随机突变或通过修饰（例如癌症基因的人工表达）转化的癌细胞系中的无限增殖（永生化）的能力。连续细胞系通常比原代细胞更坚固，更易于操作。它们具有无限的增长潜力，是获取基本信息的快速简便方法。使用连续细胞系的一些缺点是它们是经过基因修饰/转化的，可以改变生理特性并且不代表体内状态，并且随着时间的流逝，这可能会进一步改变。

而原代培养得来的细胞不具备无限分裂的能力，但可以相对更好地还原生物体内细胞生长状况。

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倍增和代数有什么区别？

倍增是培养物中细胞总数的翻倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的，是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。

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原代细胞培养过程中可能存在的错误

污染：转移主要组织进行培养时需要注意避免污染。

pH值变化：这可能是由于培养基中的盐分不正确，细菌或真菌污染，碳酸氢盐缓冲液不足，二氧化碳张力不正确等引起的。

粘附性不足（细胞不贴壁）：培养基中不含附着因子（attachment factors）或附着因子不足，培养皿或培养基污染，细胞被胰蛋白酶过度消化等。

生长缓慢：原因包括培养基的pH值变化，必需的促进生长的成分/因子耗尽，低污染，试剂储藏不当等。

细胞死亡：温度波动，二氧化碳含量过低，在融化和/或冷冻保存过程中细胞受损，有毒代谢产物浓度增加，培养基中的渗透压失衡导致细胞存活率降低。

沉淀（pH不变）：由于使用了冷冻培养基，在pH不变的培养基中可能会出现沉淀，残留的磷酸盐残留在用洗涤剂洗涤时可能会沉淀出粉末状的培养基成分。

细胞结块（细胞不贴壁且结块）：悬浮细胞可能由于钙、镁离子的存在或细胞裂解及DNA释放（过度用蛋白水解酶消化）而结块。

诱导变异性：多种试剂和培养基会诱导原代细胞的数据产生变异，研究者的处理手法也可能导致原代细胞的数据产生变异。