透析胎牛血清工艺及用途

一、透析胎牛血清的生产工艺

1、透析胎牛血清是在胎牛血清的基础上进行加工的。
胎牛血清在无菌条件下要经过多重过滤，进行一系列的检测：

理化性质检查（如渗透压和pH值）

成分检查（如内毒素和血红蛋白）

外源因子检查（如细菌、病毒和支原体）

促进细胞增殖的检查等

透析胎牛血清为保证其性能和安全性，也需具备胎牛血清的这些工艺和检查。

2、透析胎牛血清，需经过透析处理。

在4°C下用特定的透析膜对血清在0.15M NaCl中透析。由于该透析膜只允许10 kDa以下的小分子穿过，在渗透压的作用下，这些小分子便从血清中渗析到透析膜外的NaCl溶液中。10 kDa以下的小分子有化学小分子、核苷酸、某些激素、盐、低分子量蛋白质、氨基酸、细胞因子、葡萄糖、残留抗生素和其他外源分子。

那么透析的效果如何？以及透析到何时呢？

由于不可能监测全部小分子，因此常选用葡萄糖为代表。血清中葡萄糖<5 mg/dL，即可以停止透析了。透析过程中，除监测葡萄糖浓度外（可采用葡萄糖氧化酶方法测定），还需仔细监测pH值和渗透压。

3、该透析一般采用切向流过滤（tangential flow filtration）。

也就是液体流动方向与过滤方向呈垂直方向的过滤形式。该方式使液体流动在滤膜表面产生剪切力，减小了滤膜上的物质堆积，保证了稳定的过滤速度。

二、 透析胎牛血清的应用

透析胎牛血清主要用于可能需要关注小分子浓度的特殊研究。这主要包括四个领域，其中有些领域是相互交叉的，透析胎牛血清应用广泛，以下仅稍作举例。

蛋白质组学

同位素标记

细胞通讯

报告基因细胞系的筛选

1、 细胞培养条件下稳定同位素标记技术（简称SILAC）。
这是一项以质谱为基础的定量蛋白质组学技术，全称为Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它将13C或15N标记的氨基酸掺入到培养基中培养细胞，来标记细胞内新合成的蛋白质，一般培养5-6代，细胞中的蛋白质将都被同位素标记。然后质谱分析，即可比较经过不同处理的细胞，其内部蛋白质丰度的变化。它还可用于正常细胞与病理状态细胞二者的比较。为避免胎牛血清中天然氨基酸的干扰，这时就需要用到透析胎牛血清，以保证掺入细胞蛋白中的氨基酸均为标记氨基酸（常采用赖氨酸或精氨酸）。

2、工程细胞株的筛选。
以常见的工程细胞株CHO-DFGRˉ为例，该细胞自身缺乏二氢叶酸还原酶（DHFR），必须在添加了次黄嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培养液中才能得以存活。如将含有目的基因与DHFR基因的质粒转染细胞，则可以得到在不含上述添加剂的培养基上也能生长的细胞克隆。通过甲氨蝶呤（MTX）进一步筛选，可进一步得到能表达大量目的蛋白的细胞克隆。这时的胎牛血清由于不含有次黄嘌呤和胸腺嘧啶等，也常作为选择培养基的一部分，参与阳性转染细胞克隆的筛选。

3、研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、锌对某种类型细胞增殖、分化的影响。
这时也需要用透析胎牛血清，以避免培养体系中天然存在的这些物质的干扰。

三、Ausbian透析胎牛血清

作为一款备受实验人员青睐的血清，Ausbian透析胎牛血清有以下优点：

1、内毒素更低，细胞培养过程更健康。
2、每批都有提供详尽的检测报告，各项检测指标完整，清晰，实验人员一目了然。
3、从出厂到实验室，全程冷链运输，不出现冻融现象，血清质量能保证。
4、有100ml和500ml大小两种包装，实验人员选择更方便。
5、原装进口的Ausbian®透析胎牛血清，到达国内后现货才开始销售，实验室没有国际货运风险。