一招解决：细胞培养基混用问题

细胞培养常见问题大汇总——Part 2，继续为小伙伴们答疑解惑！

对于购买的商品化细胞来说，产品目录或者细胞说明书上所推荐的培养基，一般是细胞株的原始提供者推荐的培养基，或者是经过验证的最利于该细胞株生活的培养基。其他培养基存在一定培养风险。因此，应谨慎更换培养基，一定要更换，推荐实验前预先保留一份细胞种。

更换培养基有两种方法：

1、直接更换，强制使细胞适应新的培养基；

2、还有一种更温和的方法，传代细胞的时候，将新培养基与原推荐使用的培养基1：1混合，并另外分出一板细胞，用原先推荐的培养基。传代后仔细观察细胞的生长状态，如果混合培养基培养的细胞生长状态不好，应立即停止更换培养基。若生长状态好，可以继续传代分瓶，一板保留原推荐培养基，另外一板新培养基与原推荐使用的培养基3：1混合，继续观察，如果细胞状态好，可以全部换成新鲜的培养基。

普通微生物污染：培养基浑浊，高倍镜观察有微生物污染；按规定弃用并全面严格灭菌。

支原体污染：显微镜很难直接观察，细胞通常表现为细胞生长缓慢，有细胞漂浮等等，可通过MB Venor®Gem qEP试剂盒，进行支原体检测。如发现支原体污染，应按规定弃用，实验室要及时全面消毒灭菌，防止蔓延，推荐使用MB Mycoplasma-off™对细胞培养环境进行清理 ，使用Water Shield™对水槽进行清洁、预防处理。如果细胞株珍贵，可用MB相关支原体祛除试剂Mynox®、Mynox® Gold、Zell Shield®对细胞进行处理。

细胞要养好，需要选择品质优异的血清，如Ausbian®进口特级胎牛血清，它适合各种细胞培养，尤其适合难养细胞，如：干细胞、肝细胞，神经细胞，原代培养、细胞融合、转染细胞等。

WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求：

1、牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家，并应具备适当的监测系统。

2、有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。

3、证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。

4、血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。

5、无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。

6、对细胞有良好的支持繁殖作用。

我国对牛血清的质量中提出比较严格的标准要求：

包括蛋白质含量，细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。一款来自澳洲的Ausbian®胎牛血清在市场上颇受欢迎。它具有精选内毒素极低、产量充足的血清批次，满足干细胞、基因敲除、原代培养、细胞典藏、长期传代等各类细胞的培养要求；澳洲血源，完整的检测报告及灭病毒服务，为各类临床相关项目的申报提供完整支持等特点。