文献分享：如何为细胞挑选合适的血清？

牛血清是重要的细胞培养添加成分，具有终止胰蛋白酶消化，提供细胞生长所需的贴壁因子、免疫球蛋白、胰岛素等其他营养物质的作用。

根据采血时间的不同，牛血清通常分为：

• 胎牛血清（采自5-8月胎龄）

• 新生牛血清（采自出生0-7天内，也有说法是0-30天内）

• 小牛血清（采自出生30天-1年）

• 成牛血清（采自成牛）

理论上，优质的胎牛血清在细胞培养方面通常优于其他类型的血清， 与新生牛和小牛血清相比，各类生长因子含量更为丰富，且由于5-8月胎牛没有形成完整的补体系统，因此在使用的时候无需热灭活。

但是由于胎牛血清价格相对而言会更高一些，不同实验对于血清的需求也不同，因此，如何挑选适合自己实验的血清就显得尤为重要。总的原则就是，综合考虑各实验室、生产企业的条件与所培养细胞类型。除了以往根据经验和文献报道，必要时也可进行针对特定细胞的血清筛选试验，以筛选出**血清。

今天我们来分享一篇国内研究人员发表在《生物学杂志》上的标题为《不同类型牛血清对MDCK细胞培养效果研究》的文献，该研究对进口胎牛血清、国产胎牛血清、国产新生牛血清在MDCK 细胞培养过程中的促生长效果进行了阐述。

研究方法

作者在含10%不同类型牛血清的DMEM 培养液中连续传代培养MDCK 细胞，比较了三种血清培养MDCK细胞的传代稳定性、**増殖密度、倍增时间、比生长速率、贴壁率等指标。

1、贴壁培养传代稳定性观察

分别用含有10%A、B、C血清的DMEM培养基复苏MDCK工作库细胞，待细胞生长至致密单层时，分别用含有3种类型血清的DMEM培养基培养并连续传代10代，传代时细胞均按照1∶6比例，置于5%CO2、37 ℃培养箱中。每代细胞在24和48 h拍照观察细胞形态、长势及致密程度。

2、生长曲线及生长动力学分析

取第4代3种类型血清培养生长状态良好且铺满单层的MDCK细胞，计数稀释至1×10^4 个/mL，接种于24孔细胞培养板，每孔接1 mL细胞悬液。将24孔细胞培养板放置5%CO2、37 ℃培养箱中进行培养，每24 h消化3孔计数，计算平均值。按照此方法，对培养至第6代、第9代的MDCK细胞重复该试验2次，计算3次平均值,绘制细胞生长曲线。并比较3种类型血清培养MDCK细胞的**増殖密度、倍增时间、比生长速率和平均比生长速率。

3、贴壁率分析

取第4代、第6代和第9代3种类型血清培养生长状态良好且铺满单层的MDCK细胞，按1.2.1所述方法将细胞稀释至1×10^3个/mL，制成50 cells/4 mL的细胞悬液，在6孔细胞培养板中每孔加入4 mL的细胞悬液，并做平行3孔。将6孔细胞培养板放置5%CO2、37 ℃培养箱中培养8 d，出现集落后，用吸管吸去培养液，用PBS清洗，无水甲醇固定，结晶紫染色。观察并对细胞集落计数,计算平均值。

4、细胞工厂扩大培养验证

取第10代C血清培养生长状态良好且铺满单层的MDCK细胞，消化后计数，扩大培养至1层细胞工厂连续传3代，加150 mL细胞培养液,接种密度为(8～9)×10^4 个/mL，置5%CO2、37 ℃培养箱，用上述方法，接种10层细胞工厂，加1.5 L细胞培养液,接种密度为(8～9)×10^4个/mL，每12 h用细胞工厂观察台观察,待细胞长成致密单层后，继续传代培养3代，观察细胞生长情况并在长成致密单层时消化计数。

实验结果

• 在**增殖密度和倍增时间上，胎牛血清均优于新生牛血清。

• 在贴壁率方面［贴壁率(% ) = (所形成集落数/ 接种细胞数) ×100%］，进口胎牛血清略高于国产胎牛血清，差异显著；国产新生牛血清低于国产和进口胎牛血清，差异极显著。

总结

对于生产或研究所用的培养细胞，大多数情况下，生产或研究人员可以依据以往经验以及文献报道选择合适的血清。在个别不确定的情况下，也可参考以上文章的方法进行最适血清的筛选。

参考文献：

[1]李自良,王家敏,赵彩红,王美皓,李倬,乔自林,马忠仁.不同类型牛血清对MDCK细胞培养效果研究[J].生物学杂志,2020,37(04):21-25.

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