注意这个关键点，支原体检测更准确

通常，如果怀疑细胞有支原体污染，可直接取细胞上清进行支原体PCR检测。因为存在支原体污染的细胞上清中，支原体密度为通常为10^6-10^8个/ml，已足以用于PCR检测。

Minerva公司生产的支原体PCR试剂盒灵敏度高，特异性好，检测的支原体种类多，很受用户的欢迎。

但有时，支原体检测前，还需对样品中的支原体DNA进行提取。那么，什么时候需要提取呢？

当出现以下几种情况时，建议大家在进行支原体qPCR前，先进行提取支原体提取。

1、细胞培养液中存在抑制PCR的物质，这时就需要提取。细胞培养基中的血清浓度如果超过12%，那么对下游的PCR反应会产生抑制。酚红，对荧光定量PCR的检测也会干扰。这些均可以通过使用Miverva公司的支原体DNA提取试剂盒来克服。

2、对于样品类型是细胞团、疫苗、冻存细胞和石蜡包埋的组织，也需要提前提取DNA。

3、另外，如果样品中蛋白含量高于10mg/ml，则先需要用蛋白酶K进行处理。

Minerva

Venor®GeM Sample Preparation Kit

货号：56-1010

该试剂盒可从细胞上清和生物制品中分离支原体DNA，全程只需30分钟。该试剂盒符合欧洲药典规范。

分四步组成：

• 细胞溶解

• DNA特异性与层析柱结合

• 祛除残留的污染物和抑制剂

• 洗脱DNA。

需要注意的是，常规细菌和哺乳动物细胞的DNA提取试剂盒是否能用于支原体DNA提取，值得怀疑。因为如果都提取出来，则会对下游PCR检测带来干扰。总之，提取后的DNA应具有一定的纯度和产率。