挑选胎牛血清为什么要对内毒素特别关注？- 威正翔禹

有些同学经常看缔一生物文章会发现经常说在选购血清的时候，一定要关注血清的“内毒素指标”，这是为什么呢？挑选胎牛血清的时候为什么要对内毒素特别关注呢？本篇文章缔一生物小助手就跟大家详细说说。

内毒素含量也是划分血清等级的标准之一，内毒素含量越低的血清，级别就越高，以胎牛血清为例：

当血清中内毒素含量≤10EU/ml时，此血清为特级胎牛血清；

当血清中内毒素含量﹥10EU/ml，≤ 25EU/ml时，此血清为优级胎牛血清；

当血清中内毒素含量≥ 25EU/ml时，此血清为标准级胎牛血清。

(目前，由于同一厂家，不同批次的血清，内毒素数值也可能有较大差异，因此很多血清厂家在名称上已不注明级别。但使用者仍可通过检测报告，自行甄别挑选。)

　　那这血清中内毒素的高低对细胞培养会有啥影响啊？为什么选血清要选内毒素含量低的呢？

　　所以今天我们就来聊聊，细胞培养中血清的内毒素问题。

1、人体对细菌内毒素极为敏感

　　极微量（1-5ng/kg，而1ng≈2.5EU）内毒素就能引起体温上升，发热反应持续约4小时后逐渐消退。

　　自然感染时，因革兰氏阴性菌不断生长繁殖，同时伴有陆续死亡、释出内毒素，故发热反应将持续至体内病原菌完全消灭为止。

　　内毒素引起发热反应的原因是内毒素作用于体内的巨噬细胞、中性粒细胞等，使之产生IL-1、IL-6和TNF-α等细胞因子，这些细胞因子作用于宿主下丘脑的体温调节中枢，促使体温升高发热。

　　由于内毒素是细菌死亡裂解或自溶引起的，因此环境中大量存在内毒素。但是如果在细胞培养过程中，出现了大量内毒素，而细胞要用于某些疾病的治疗，回输人体，这是万万不行的。

2、内毒素对细胞培养的影响

　　细胞遗传代谢的影响

　　此前，有人做过实验，来观察内毒素对细胞培养的影响，记录的影响包括：刺激白细胞培养物产生组织因子、激活鼠巨噬细胞，以及通过极低水平（低于1 ng/mL）的内毒素抑制鼠类红细胞集落形成等一系列指标。

　　随后，发表了许多关于内毒素对体外细胞功能和生长影响的论文。

Morris等人发现（1），只需暴露 6 小时，低至 0.5 ng/mL 的内毒素水平可以增加马腹膜巨噬细胞中IL-6的产生。Mattern等人发现（2）， 100 ng/mL 内毒素可以刺激人类 T 细胞的增殖及其淋巴因子的产生，但这种刺激需要与先前暴露于内毒素的单核细胞直接物理接触。Sibley等人报道，10 到 200 ng/mL 内毒素刺激鼠 B 细胞肿瘤细胞系 (70Z/3) 完成 IgM 的产生，然后在细胞表面表达（3）。

　　从现有的研究可以看出，内毒素对于细胞培养影响还是很大的：

　　改变细胞外形

　　活化细胞，产生讯息传递物质

　　抑制酶活性

　　抑制人工受精的成功率等

　　血清中内毒素含量过高，更容易导致细胞“亚健康”，造成数据不准，或细胞状态不良、老化、甚至死亡，导致试验中断失败。所以要尽量选择内毒素低的血清。

　　对实验结果的影响

　　内毒素会加速细胞衰老、凋亡，细胞提前死亡，影响实验结果，导致实验数据产生波动。

　　参考文献：

1.Morris,D.D., Crowe, N., Moore, J.N.and Moldawer, L.L. Endotoxin-Induced Production ofInterleukin 6 by Equine Peritoneal Macrophages In Vitro. Am. J. Vet. Res.53:1298-1301 (1992).

2.Mattern, T.,Thanhauser, A., Reiling, N.,Toellner, K., Duchrow, M., Kusumoto, S.,Rietschel,E.T., Ernst, M., Brade, H.,Flad, H.D. and Ulmer, A.J. Endotoxin and Lipid A StimulateProliferation of Human T Cells In the Presence of Autologous Monocytes. J.Immunol. 153:2996-3004(1994).

3.Sibley, C.H.,Terry, A. and Raetz, C.R.H.Induction of K Light Chain Synthesis in 70Z/3 BLymphoma Cells by Chemically Defined Lipid A Precursors. J. Biol. Chem.263:5098-5103 (1988).

3、选择内毒素低的优质血清

　　一般来说，细胞或组织培养过程中内毒素污染源通常来自于血清、培养液及外加药物配制用水等。

　　所以选择内毒素含量低的优质血清就显得尤为重要。缔一生物是Ausbian血清国内总代理，进口的澳洲血清，助力国内细胞培养！了解更多Ausbian血清，欢迎访问缔一生物官网：http://www.dyshengwu.com/‍。