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解读:『血清融化三步法——让血清更好用』背后的秘密原理!

2017-08-25 12:44

  提起细胞培养中,牛血清的融化,大家首先想到的就是4℃过夜法。今天小威把国际上流行多年的『血清融化三步法』介绍给大家,让你知道怎样让你的血清,通过合适的融化,事半功倍!


  与4℃过夜法相比,三步法为什么对血清更好呢?重点有二!


  其一:关系到沉淀出现的几率!


  记得吗?血清在融化过程中,瓶子里冰块的底部你会看见亮亮的蛋白丝在下沉,如同蜂蜜溶于水时的亮线,这就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔点高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高级冰淇淋和大棒冰的区别,你懂得!)试想,如果采用4℃过夜的方法,1瓶500毫升的血清融化好,大约需要10小时左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此时就很容易有一些蛋白饱和析出,(大多是脂蛋白和纤连蛋白),这就是血清融化中产生沉淀的重要原因之一。


  采用三步法,只要2.5个小时,温和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化过程中可以间断轻轻摇摆瓶子,让蛋白在瓶中混匀。此方法不但节约了时间,而且最大限度减少了血清沉淀出现的几率。



   血清融化过程中,蛋白质会比水先融化。冰块底部亮亮的细丝就是融化中的蛋白


  其二:血清在培养细胞中,最重要的是利用它的活性的因子,因此,融化过程中最大限度地保留因子的活性,就变得非常重要。回忆一下,细胞复苏时,要保持细胞的活性,我们是要遵循“快融”原则还是“慢融”原则呢?快融!血清同样如此!三步法需要两个半小时,4℃过夜需要大约10个小时(冰箱一般设2-8℃,所以各实验室融化时间会稍有出入)。哪个速度对保留活性更好?不言而喻!


  下面,我们详细解读『血清的三步融化法』的步骤:


  图:刚从-28℃拿出的血清,是这个样子的


  融化血清第一步


      温度:室温


      时间:100ml - 35分钟


      500ml - 90分钟


      1000ml - 100分钟


      或


      温度:15-20℃水浴(新接的自来水24℃上下)


      时间:100ml - 5分钟


      500ml - 18分钟


      1000ml - 20分钟


  图:这是最近Ausbian血清的大区经理周博,在天津血研所实验室拍到的——实验人员三步法化血清的图片,为了节约时间,实验人员采取的是第一步20℃水浴18min的方法。(用现接的自来水放入冰冻的血清,即可达到20℃水浴的效果。一般实验室没有能制冷到20℃的水浴锅)


  融化血清第二步


      温度:20℃水浴(新接的自来水24℃上下)


      时间:100ml - 15分钟


      500ml - 25分钟


      1000ml - 30分钟


      图:第二步,仍旧是新接的自来水浴,25min


  融化血清第三步


      温度:37℃水浴


      时间:100ml - 20分钟


      500ml - 35分钟


      1000ml - 45分钟


  第三步,将血清置于37℃水浴锅中进行融化,大约30nmin左右,血清就彻底融化,可以分装了。


  图:大家看,使用三步法融化的血清十分清亮,养细胞的效果也是棒棒哒。


      注意


          1.在水浴过程中,血清的平面要完全浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动,使血清混匀,但不要产生泡沫!


          2.胎牛血清不推荐热灭活。


          3.此三步法适用于所有品牌、所有级别的进口或国产血清,均可让血清在减少沉淀、保留活性、提高细胞培养效果方面,得到不同程度的提高!


  看到这里,你是不是迫不及待的想试试融化血清的三步法了呢?其实,想快速得到高品质的血清,除了科学的融化方法,自身品质出众的血清,完备的运输冷链,贴心的售后服务,这些都是不可或缺的!