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细胞培养新手必读!
2017-08-30 11:19来源:首都医科大学附属北京世纪坛医院  

  在进行科学研究时,细胞培养作为一项基本的研究方法,经常会被用到。可细胞培养到底是什么样的过程呢?下面是我们的实验员培养细胞的心得体会:一养细胞深似海,从此自由是路人。开始养细胞之前就要做好随时照顾它的心理准备,三天打鱼两天晒网不仅无法养出状态绝佳的细胞,还有可能让娇贵的细胞宝宝全军覆没,那么,怎么才能培养出符合条件的细胞呢?


  1、选择正确的培养基


  在养细胞之前,就要了解,你所养细胞的来源以及种类和名称,查阅一定量的文献,确定所需培养液种类以及是否需要添加特殊成分,常用的细胞培养液有DMEM、RPMI1640、F12等等,一些常见的细胞基本可以使用这几种培养基中的一种来培养,有的需要加入一定其他成分,这需要根据不同的细胞类型,查ATCC细胞库或者查文献,才能找到所需最佳培养液。选择正确的培养液是养好细胞的第一步。


  2、了解细胞的生长习性


  不同的细胞生长习性不同。如成纤维细胞是贴壁生长,有一定的密度依赖性,密度小可能会出现不增殖,状态差的情况,接种密度大时则需要隔天传代,频繁传代则影响细胞状态;再如RPMI-8226人多发性骨髓瘤细胞,是悬浮生长的,传代需离心弃去上清即可。总之,了解细胞生长习性,再加上正确的计数,才能掌握好传代的密度。



  3、选择优质的血清


  血清中含有细胞生长所必须的生长因子,作为哺乳动物细胞培养的附加物,血清的添加是十分重要的,因此,选择优质的血清,是细胞养殖成功与否的关键!


  4、及时传代和更换培养液


  在细胞增殖到一定的密度后,要及时传代,根据细胞的生长速度和密度,及时更换培养液。更换过勤,浪费培养液,更换不够及时,则细胞状态转差,一般需隔天更换培养液,具体可根据所养细胞种类予以调整。


  5、绝对的无菌意识


  前面林林总总全部都注意好了,如果无菌意识差,细胞中混入了微生物,则千里之堤溃于蚁穴,细菌的生长速度和破坏力,将迅速占领培养皿,破坏细胞结构,有些初学者会在培养液中加入1%的双抗,但是,无菌意识不强,双抗亦无法拯救你的细胞!


  6、倾心的呵护,频繁的观察


  做到以上几点,就可以开始养你的细胞了,但是再次重申细胞娇弱,在养细胞的过程中,难免会出现一些意想不到的问题,要想成功养好细胞,时时惦记它 ,频繁地观察,初期一天观察2次都不足为过,出现任何预料外的情况,及时处理,才能保障收获一盘“漂亮”的细胞。




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