STEMin1™解离试剂为化学限定、无血清、无动物成分解离溶液。
一、特点:
Ø对细胞温和:1分钟内解离细胞,不影响活力
Ø保留标志物:细胞表面标志物表位不变
二、操作步骤:
1.推荐接种密度为15000个细胞/cm2,参考下表
培养瓶 | 推荐接种密度 | 总细胞数/瓶 | 培养基体积 |
T12.5 | 15000个细胞/cm2 | 0.2 × 106 | 3-4ml/瓶 |
T25 | 0.4 × 106 | 5-6ml/瓶 |
2.每日观察细胞形态和健康状况
3.每隔一天更换培养基
4. 一旦细胞长至70-80%,即传代1次
5.吸弃培养基,勿干扰单细胞层
6.用足量DPBS冲洗细胞,去除残留培养基
7.吸弃DPBS
8.向培养瓶中加入适量STEMin1™解离溶液(参考下表)
培养瓶 | 推荐STEMin1™解离试剂体积 |
T12.5 | 0.3ml |
T25 | 0.5ml |
T75 | 1.5ml |
T175 | 3ml |
9. 轻轻晃动培养瓶,使解离试剂完全覆盖细胞
10.培养瓶在37°C孵育。完全解离需1-2分钟
11.显微镜下观察细胞。当细胞变圆,轻轻拍打培养瓶使细胞完全脱壁
12.加入等量STEMin1TM中和剂(货号TCL209-100ml)
13.轻轻吹打,使细胞均一分布
14.离心600rpm 2-3分钟
15.弃上清,加3ml新鲜完全培养基重悬细胞
16.用计数仪进行细胞计数
17.按照推荐的细胞接种密度,在已包被贴壁试剂和已加入新鲜完全培养基的新培养瓶中接种细胞。